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RNA操作注意事項與實驗技巧2015/8/31

由于rna酶的廣泛存在與難以滅活的頑固特性。使得RNA的提取純化和后續工作變得非常困難。為了保證RNA的研究工作成功，請仔細閱讀下列注意事項，相信它能幫助您解決常見的問題。歸根究底，RNA工作的主要問...

特殊組織DNA的提取及鑒定2015/8/28

1、提取DNA的簡易方法:1)、從全血中提取DNA：取20μl抗凝血于0.5ml無菌管中，加500μl左右的ddH2O混勻后，12000rpm離心2分鐘，棄上清，（若沉淀中仍有紅細胞,需重復此操作1-...

RNA印跡雜交2015/8/20

Northern印跡的制備預備：1．按下述步驟，每泳道加10～20μg總RNA或0.5～1μgpoly(A)+RNA進行甲醛/瓊脂糖凝膠電泳，將凝膠放在紫外線透照儀上，旁邊置一標尺進行拍照。a.總RN...

士鋒RNAi實驗原理與方法2015/7/29

年來的研究表明，將與mRNA對應的正義RNA和反義RNA組成的雙鏈RNA(dsRNA)導入細胞，可以使mRNA發生特異性的降解，導致其相應的基因沉默。這種轉錄后基因沉默機制(post-transcri...

電泳操作要點及常見差錯和失敗原因分析2015/7/24

醋酸纖維素是提纖維素的羥基乙酰化形成的纖維素醋酸酯。由該物質制成的薄膜稱為醋酸纖維素薄膜。種薄膜對蛋白質樣品吸附性小，幾乎能*消除紙電泳中出現的“拖尾”現象，又因為膜的親水性比較小，它所容納的緩沖液也...

含多個磷酸化位點的多肽的合成2015/7/15

生命活動與蛋白質的動態變化密切相關,很多情況下某些蛋白質是通過各種翻譯后修飾來完成或改變其功能。在數量眾多的蛋白質翻譯后修飾中，蛋白質磷酸化修飾無疑是zui重要的一類，它是指通過蛋白激酶（Protei...

外源基因的誘導表達2015/7/10

1．目的了解外源基因在原核細胞中表達的特點和方法。2．原理外源基因克隆在含有lac啟動子的表達系統中。先讓宿主菌生長，lacI產生的阻遏蛋白與lac操縱基因結合抑制下游的外源基因轉錄。向培養基中加入誘...

士鋒重組蛋白質的表達、純化、復性和定量2015/7/2

一、重組蛋白質的誘導表達1.挑取轉化有質粒的單菌落，接種于3ml選擇性LB液體培養基中，37℃，250rpm/min振搖培養過夜。2.次日將培養過夜的菌液500μl再接種于10ml（1:20）選擇性L...

四種紫外吸收法測蛋白質含量2015/6/23

1.280nm的光吸收法因蛋白質分子中的酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸在280nm處具有zui大吸收，且各種蛋白質的這三種氨基酸的含量差別不大，因此測定蛋白質溶液在280nm處的吸光度值是zui常用的紫外吸...

科學家可定位蛋白質2015/6/15

約翰斯霍普金斯大學的科學家們使用一種他們研發的方法，在將人體中一種細胞移動到位點時，能夠不時的進行觀察。這種方法可以了解一種蛋白質為何和如何在一個位置能進行信號傳遞和表達增加，而同樣的蛋白質在另一地點...

免疫共沉淀技術在探索可能信號轉導機制中的應用2015/6/11

在從事細胞信號轉導的研究過程中我們常常需要探尋新的通路。在縱橫交錯，紛繁復雜的cross-talk中如何篩選可能的路徑是signaltransduction領域永恒的話題，而免疫共沉淀技術則是常用而簡...

醋酸纖維素薄膜電泳操作要點及常見差錯和失敗原因分析2015/6/9

醋酸纖維素是提纖維素的羥基乙酰化形成的纖維素醋酸酯。由該物質制成的薄膜稱為醋酸纖維素薄膜。種薄膜對蛋白質樣品吸附性小，幾乎能*消除紙電泳中出現的“拖尾”現象，又因為膜的親水性比較小，它所容納的緩沖液也...

血漿游離血紅蛋白測定2015/6/3

實驗原理血紅蛋白具有類過氧化物酶活性，可催化H2O2釋放新生態氧，使鄰甲聯苯胺氧化發生顏色變化，由無色zui終變為藍紫色。根據顯色深淺與標準進行比較，可測出其含量。實驗方法材料：1．2g/L鄰甲聯苯胺...

蛋白質的表達、分離和純化2015/6/1

目的要求（1）了解克隆基因表達的方法和意義。（2）了解重組蛋白親和層析分離純化的方法。實驗原理克隆基因在細胞中表達對理論研究和實驗應用都具有重要的意義。通過表達能探索和研究基因的功能以及基因表達調控的...

iTRAQ蛋白質定量與生物標志物發現技術平臺2015/5/29

定量蛋白質組學是蛋白質研究的前沿學科。目前常用的定量蛋白質組學研究技術有熒光差異凝膠電泳（DIGE）、同位素親和標記（ICAT）等。同位素標記相對和定量（iTRAQ）技術是近年來開發的一種新的蛋白質組...