實(shí)驗(yàn)?zāi)康?br />1.了解轉(zhuǎn)化的概念及其在分子生物學(xué)研究中的意義。
2.學(xué)習(xí)氯化鈣法制備大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的方法。
3.學(xué)習(xí)將外源質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)入受體菌細(xì)胞并篩選轉(zhuǎn)化體的方法。

實(shí)驗(yàn)原理
轉(zhuǎn)化( Transformation )是將異源 DNA 分子引入另一細(xì)胞品系，使受體細(xì)胞獲得新的遺傳性狀的一種手段，它是微生物遺傳、分子遺傳、基因工程等研究的基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)。
轉(zhuǎn)化中的受體細(xì)胞： 轉(zhuǎn)化過程所用的受體細(xì)胞一般是限制性修飾系統(tǒng)缺陷的變異株，即不含限制性內(nèi)切酶和甲基化酶的突變株，常用 RM 符號(hào)表示。
轉(zhuǎn)化方法：電擊法、 CaCl2、 RuCl等化學(xué)試劑法
感受態(tài)細(xì)胞：處理后，細(xì)胞膜的通透性發(fā)生變化，成為能容許外源 DNA 分子通過時(shí)細(xì)胞的狀態(tài)。
轉(zhuǎn)化細(xì)胞(轉(zhuǎn)化子)：帶有異源 DNA 分子的受體細(xì)胞( Transformant )。

本實(shí)驗(yàn)以 E.coli DH5α 菌株為受體細(xì)胞，用 CaCl2 處理受體菌使其處于為感受態(tài)，然后與 pUC18質(zhì)粒共保溫，實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化。 pUC18質(zhì)粒攜帶有抗氨芐青霉素的基因，因而使接受了該質(zhì)粒的受體菌具有抗氨芐青霉的特性，用 Apr符號(hào)表示。將經(jīng)過轉(zhuǎn)化后的全部受體細(xì)胞經(jīng)過適應(yīng)稀釋，在含氨芐青霉素的平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)，只有轉(zhuǎn)化體才能存活，而未受轉(zhuǎn)化的受體細(xì)胞則因無抵抗氨芐青霉素的能力而死亡。
大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞制備及外源DNA的轉(zhuǎn)化