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豬瘟病毒抗體Elisa試劑盒技術參數

閱讀:316發布時間:2014-3-13

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豬瘟病毒抗體Elisa試劑盒操作步驟

  • 編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)

 

 

  • 加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
  • 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
  • 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
  • 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
  • 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。 
  • 溫育:操作同3。
  • 洗滌:操作同5。
  • 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
  • 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)

測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值) 測定應在加終止液后15分鐘以內進行

豬瘟病毒抗體Elisa試劑盒計算和結果判定:

  試驗有效性:陽性對照孔平均值1.00; 陰性對照平均值0.10

  臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

  陰性判定:樣品OD值< 臨界值(CUT OFF)者為瘟病毒抗體(CSFV Ab)陰性

  陽性判定:樣品OD值 臨界值(CUT OFF)者為瘟病毒抗體(CSFV Ab)陽性

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