DNA裂解因子抗體動物體內單抗的方法迄今為止,通常情況下均采用動物體內單抗的方法,鑒于絕大多數動物用雜交瘤均由BALB/c小鼠的骨髓瘤細胞與同品系的脾細胞融合而得,因此使用的動物當然*BALB/c小鼠。本方法即將雜交瘤細胞接種于小鼠腹腔內,在小鼠腹腔內生長雜交瘤,并產生腹水,因而可得到大量的腹水單抗且抗體濃度很高。可見該法操作簡便、經濟,不過,腹水中常混有小鼠的各種雜蛋白(包括Ig),因此在很多情況下要提純后才能使用,而且還有污染動物病毒的危險,故而用SPF級小鼠。 DNA裂解因子抗體A、材料:a. 成年BALB/c小鼠。b. 降植烷(Pristane)或液體石蠟。c. 處于對數生*的雜交瘤細胞。
B、方法:a. 腹腔接種降植烷或液體石蠟,每只小鼠0.3-0.5ml。b. 7-10天后腹腔接種用PBS或無血清培養基稀釋的雜交瘤細胞,每只小鼠5×105/0.2ml。c. 間隔5天后,每天觀察小鼠腹水產生情況,如腹部明顯膨大,以手觸摸時,皮膚有緊張感,即可用16號針頭采集腹水,一般可連續采2-3次,通常每只小鼠可采5-10ml腹水;d. 將腹水離心(2000r/min 5分鐘),除去細胞成分和其他的沉淀物,收集上清,測定抗體效價,分裝,-70℃凍存備用,或凍干保存。
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Mouse Bone morphogenetic protein 7,BMP-7 小鼠骨成型蛋白7(BMP-7)
Mouse Hyaluronic acid,HA 小鼠透明質酸(HA)
Mouse ghcagons-like pepfide 1,GLP-1 小鼠胰高血糖素樣肽1(GLP-1)
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Mouse brain-gut peptides,BGP/Gehrelin 小鼠腦腸肽(BGP/Gehrelin)
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Mouse apoprotein,apo-A1 小鼠載脂蛋白A1(apo-A1)
Mouse apoprotein B100,apo-B100 小鼠載脂蛋白B100(apo-B100)
Mouse 25-Dihydroxy vitamin D3,HVD3 小鼠25羥基*3(25(OH)D3/25 HVD3)
Mouse N-terminal procollagen Ⅲ propeptide,PⅢNP 小鼠Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)
Mouse Vitamin C,VC 小鼠*(VC)
Mouse Collagen Type Ⅱ,Col Ⅱ 小鼠Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)
Mouse Vitamin B6,VB6 小鼠*6(VB6)
Mouse Collagen Type Ⅰ,Col Ⅰ 小鼠Ⅰ型膠原(Col Ⅰ)
Mouse Carboxyterminal propeptide of type Ⅰ procollagen,PⅠCP 小鼠Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)
Mouse soluble P-selectin,sP-selectin 小鼠可溶性P選擇素(sP-selectin)
(2) 體外培養單抗的方法總體上講,雜交瘤細胞系并不是嚴格的貼壁依賴細胞(anchorage dependent cell,ADC),因此既可以進行單層細胞培養,又可以進行懸浮培養。雜交瘤細胞的單層細胞培養法是各個實驗室zui常用的手段,即將雜交瘤細胞加入培養瓶中,以含10-15%小牛血清的培養基培養,細胞濃度以1×106-2×106/ml為佳,然后收集培養上清,其中單抗含量約10-50ug/ml。顯然,這種方法制備的單抗量極為有限,無疑是不適用于單抗的大規模。要想在體外大量制備單抗,就必須進行雜交瘤細胞的大量(高密度)培養。單位體積內細胞數量越多,細胞存活時間越長,單抗的濃度就越高,產量就越大。