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“恒遠(yuǎn)生物”產(chǎn)品文獻(xiàn)：地龍降壓膠囊對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠腎胺酶表達(dá)的影響＊
閱讀：1187 發(fā)布時(shí)間：2019-4-19| 提 供 商 | 上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司 | 資料大小 | 456.5KB |
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地龍降壓膠囊對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠腎胺酶表達(dá)的影響＊
柴輝１ 劉斌１ 李應(yīng)東１ 孫少伯１ 朱貝貝１ 趙信科１ 劉凱１
［摘要］ 目的：觀察地龍降壓膠囊對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠（ＳＨＲ）腎胺酶表達(dá)的影響，以探討地龍降壓膠囊治療原發(fā)性高血壓的作用機(jī)制。方法：?。玻粗唬钢荦g雄性ＳＨＲ，根據(jù)收縮壓隨機(jī)分為模型組 （等容量蒸餾水灌胃）及地龍降壓膠囊高、低劑量組 （分別以地龍降壓膠囊２４０ ｍｇ／ｋｇ、１２０ ｍｇ／ｋｇ 灌胃），每組８ 只。另取８ 只 ＷＫＹ 雄性大鼠作為正常對(duì)照組 （等容量蒸餾水灌胃）。分別于連續(xù)給藥前、給藥后第２ 周、４ 周、６ 周、８ 周測(cè)定尾動(dòng)脈收縮壓。末次給藥后，采用 ＥＬＩＳＡ 法檢測(cè)大鼠血漿兒茶酚胺和血清腎胺酶含量。采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)大鼠腎
臟腎胺酶的表達(dá)。結(jié)果：地龍降壓膠囊有效降低了 ＳＨＲ 收縮壓、血漿兒茶酚胺水平（Ｐ＜０．０５）；升高了 ＳＨＲ 腎胺酶水平（Ｐ＜０．０５）。結(jié)論：地龍降壓膠囊能有效降低血壓，其作用機(jī)制可能是通過調(diào)節(jié)腎胺酶表達(dá)水平，從而影響血漿兒茶酚胺水平實(shí)現(xiàn)的。
［關(guān)鍵詞］ 地龍降壓膠囊；自發(fā)性高血壓大鼠；交感神經(jīng)；腎胺酶；兒茶酚胺
ｄｏｉ：１０．１３２０１／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－１４３９．２０１８．０１．０１５
［中圖分類號(hào)］ Ｒ５４４．１ ［文獻(xiàn)標(biāo)志碼］ Ａ
ＥｆｆｅｃｔｏｆＤｉｌｏｎｇａｎｔｉｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｃａｐｓｕｌｅｏｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆｒｅｎａｌａｓｅｉｎｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｒａｔｓ
ＣＨＡＩＨｕｉ ＬＩＵＢｉｎ ＬＩＹｉｎｇｄｏｎｇ ＳＵＮＳｈａｏｂｏ ＺＨＵＢｅｉｂｅｉ ＺＨＡＯＸｉｎｋｅ ＬＩＵ Ｋａｉ
（ＧａｎｓｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｌａｎｚｈｏｕ，７３００００，Ｃｈｉｎａ）
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＬＩＹｉｎｇｄｏｎｇ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｙｄｊ４１２＠１６３．ｃｏｍ
Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＤｉｌｏｎｇＡｎｔｉｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅＣａｐｓｕｌｅｏｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｒｅｎａｌａｓｅｉｎ ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｒａｔｓ（ＳＨＲ），ａｎｄｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｕｎｄｅｒｌｉｎｇｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｔｈｅ２４ｍａｌｅＳＨＲｓｏｆ８ ｗｅｅｋｓｏｌｄ ｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏ ｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ （ｇａｖａｇｅｏｆｄｉｓｔｉｌｌｅｄ ｗａｔｅｒｏｆｔｈｅｓａｍｅｖｏｌｕｍｅ），ｈｉｇｈｄｏｓｅ ｇｒｏｕｐ，ｌｏｗｄｏｓｅｇｒｏｕｐ（２４０ ｍｇ／ｋｇ，１２０ ｍｇ／ｋｇ），８ｒａｔｓｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ．Ａｎｏｔｈｅｒ８ ＷＫＹ ｍａｌｅｒａｔｓｗｅｒｅｔａｋｅｎａｓ ｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ （ｇａｖａｇｅｏｆｄｉｓｔｉｌｌｅｄ ｗａｔｅｒｏｆｔｈｅｓａｍｅｖｏｌｕｍｅ）．Ｔｈｅｃａｒｏｔｉｄｓｙｓｔｏｌｉｃｂｌｏｏｄｐｒｅｓｓｕｒｅ ｗａｓ ｍｅａｓｕｒｅｄａｔ２ｗｅｅｋｓ，４ｗｅｅｋｓ，６ｗｅｅｋｓａｎｄ８ｗｅｅｋｓａｆｔｅｒｔｈｅｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ．Ａｆｔｅｒｔｈｅｌａｓｔａｄｍｉｎｉｓ－ ｔｒａｔｉｏｎ，ｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆｐｌａｓｍａｃａｔｅｃｈｏｌａｍｉｎｅｓａｎｄｓｅｒｕｍｒｅｎａｌａｓｅｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄｂｙＥＬＩＳＡ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｒｅｎａｌａｓｅ ｉｎＫｉｄｎｅｙ ｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｄｉｌｏｎｇ Ａｎｔｉｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅ Ｃａｐｓｕｌｅｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙｒｅｄｕｃｅｄｔｈｅ
ＳＨＲｓｙｓｔｏｌｉｃｂｌｏｏｄｐｒｅｓｓｕｒｅ，ｐｌａｓｍａｃａｔｅｃｈｏｌａｍｉｎｅｌｅｖｅｌｓ（Ｐ＜０．０５）；ｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆＳＨＲｒｅｎａｌａｓｅ （Ｐ＜ ０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＤｉｌｏｎｇＡｎｔｉｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅＣａｐｓｕｌｅｓｃａｎｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙｒｅｄｕｃｅｂｌｏｏｄｐｒｅｓｓｕｒｅａｎｄｉｔｓｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｍａｙ
ｂｅｔｈｒｏｕｇｈｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｒｅｎａｌａｓｅ，ａｎｄｔｈｅｎａｆｆｅｃｔｉｎｇｐｌａｓｍａｃａｔｅｃｈｏｌａｍｉｎｅｌｅｖｅｌｓ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ Ｄｉｌｏｎｇａｎｔｉｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｃａｐｓｕｌｅ；ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｒａｔｓ；ｓｙｍｐａｔｈｅｔｉｃ；ｒｅｎａｌａｓｅ；ｃａｔｅ－ ｃｈｏｌａｍｉｎｅｓ
高血壓是以動(dòng)脈血壓進(jìn)行性升高為表現(xiàn)的心血管疾病，是心血管疾病重要的危險(xiǎn)因素，致殘率、致死率高。有研究認(rèn)為原發(fā)性高血壓是以交感神經(jīng)過度興奮為起點(diǎn)，引起兒茶酚胺分泌增加，血管收縮，進(jìn) 而發(fā)生高血壓并持續(xù)進(jìn)展［１］。Ｍｉｌａｎｉ等［２］研究發(fā)現(xiàn)腎胺酶可以降解兒茶酚胺，進(jìn)而調(diào)節(jié)
＊ 基金項(xiàng)目：甘肅省自然科學(xué)基金（Ｎｏ：１６１０ＲＪＺＡ０６８）；甘肅中醫(yī)藥大學(xué)研究生創(chuàng)新基金（Ｎｏ：ＣＸ２０１６－０８）
１ 甘肅中醫(yī)藥大學(xué)（蘭州，７３００００）
通信作者：李應(yīng)東，Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｙｄｊ４１２＠１６３．ｃｏｍ
血壓。地龍降壓膠囊是甘肅中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院的院內(nèi)制劑，在臨床使用中對(duì)高血壓有較好的治療 效果，但是在對(duì)其作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究較少，尚未 發(fā)現(xiàn)有涉及其對(duì)交感神經(jīng)系統(tǒng)的作用。本研究通過觀察地龍降壓膠囊對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠（ＳＨＲ）血漿兒茶酚胺濃度以及血清腎胺酶水平變化的影響，探討地龍降壓膠囊的降壓作用與影響腎胺酶表 達(dá)水平的關(guān)系，為其治療高血壓提供理論基礎(chǔ)和實(shí) 驗(yàn)依據(jù)。
ＣＨＡＩＨｕｉ，ｅｔａｌ．ＥｆｆｅｃｔｏｆＤｉｌｏｎｇａｎｔｉｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｃａｐｓｕｌｅｏｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｒｅｎａｌａｓｅｉｎＳＨＲｓ
·６７·
１ 材料與方法
１．１ 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
２４只ＳＨＲ 和８只 ＷＫＹＳＰＦ 級(jí)大鼠，８ 周齡，雄性，購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司， 許可證編號(hào)：ＳＣＸＫ （京）２０１２－０００１。
１．２ 實(shí)驗(yàn)藥物與試劑
受試藥物：地 龍降壓膠囊（甘 肅中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，批號(hào)：１５１０２６）；試劑：水合氯醛（天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所，批 號(hào)：２０１５０１０５）；４％多聚 甲 醛 （北 京 索 萊 寶 科 技 有 限 公 司，批 號(hào)： ２０１６０４２９）；ＲａｔＣＡ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ９６Ｔ（上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司，批 號(hào)：２０１６０５）；ＲｂａＲｅｎａｌａｓｅ
（北 京 博 奧 森 生 物 技 術(shù) 有 限 公 司，批 號(hào)：ＡＣ ０６０３１７５７）。
１．３ 實(shí)驗(yàn)儀器
智能無創(chuàng)血壓計(jì)－鼠儀 ＢＰ－９８Ａ（北京軟隆生物技術(shù)有限公司）；ＪＭ－Ａ５００２ 型電子天平（諸暨市超澤衡器設(shè)備有限公司）；高 速低溫離心機(jī) （德 國Ｈｅｒａｅｕｓ公司）；微型混合器（金壇市恒豐儀器廠）； Ｉｎｆｉｎｉｔｅ２００ＰＲＯ 序列多功能酶標(biāo)儀（Ｔｅｃａｎ 奧地利有限責(zé)任公司）；ＺＷＹＲ－２４０ 恒溫培養(yǎng)振蕩器（上海智城分析儀器有限公司）；ＥＧ１６００ 型包埋儀（德 國 Ｌｅｉｃａ 公司）；ＲＭ ２１３５ 型切片機(jī) （德 國 Ｌｅｉｃａ公司）；ＯＬＹＭＰＵＳＢＸ５ 顯微鏡（日本 Ｏｌｙｍ－ ｐｕｓ 珠式會(huì)社）。
１．４ 動(dòng)物分組及給藥
?。钢荦g雄性ＳＨＲ２４只和８周齡雄性 ＷＫＹ大鼠８只，適應(yīng)性喂養(yǎng)１ 周后，用智能無創(chuàng)血壓計(jì)－ 鼠儀ＢＰ－９８Ａ 測(cè)量 ＳＨＲ 收縮壓，根據(jù)收縮壓值查隨機(jī)數(shù)字表，隨機(jī)分為３ 組：模型組、地龍降壓膠囊低劑量組、地龍降壓膠囊高劑量組，每組８ 只。地龍降壓膠囊干預(yù)組，分別以每日地龍降壓膠囊低劑
化檢測(cè)。
１．５．３ 指標(biāo)檢測(cè) 血漿兒茶酚胺（ＣＡ）、血清腎胺酶（ｒｅｎａｌａｓｅ）水平測(cè)定采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)，嚴(yán)格按照試劑盒說明進(jìn)行操作。
１．６ 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
采用ＳＰＳＳ２０．０ 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。數(shù)據(jù)結(jié)果符合正態(tài)分布以ｘ珚±ｓ 表示，定量資料多組間兩兩比較采用方差分析 （方差齊的采用 ＬＳＤ 檢驗(yàn)，
方差不齊者采用 Ｄｕｎｎｅｔｔ'ｔ檢驗(yàn)），以 Ｐ＜０．０５ 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
２ 結(jié) 果
２．１ 地龍降壓膠囊對(duì)ＳＨＲ 收縮壓的影響
與 ＷＫＹ 組比較，模型組大鼠收縮壓隨鼠齡增
加逐漸升高（Ｐ＜０．０５）；與模型組相比，隨著給藥時(shí)間的延長，地龍降壓膠囊高劑量組給藥第４ 周收縮
壓下降有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（Ｐ＜０．０５），地龍降壓膠囊低劑量組給藥第６ 周收縮壓下降有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 （Ｐ＜ ０．０５）；地龍降壓膠囊高、低劑量組之間的差異無統(tǒng)
計(jì)學(xué)意義（Ｐ＞０．０５）。見表１。
２．２ 地龍降壓膠囊對(duì)ＳＨＲ 血漿兒茶酚胺水平、血
清腎胺酶水平的影響
與 ＷＫＹ 組比較，模型組大鼠血漿兒茶酚胺水
平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）；與模型組比較，地龍降壓膠囊高、低劑量組大鼠血漿兒茶酚胺
水平均降低（Ｐ＜０．０５）。給藥８ 周后，與 ＷＫＹ 組比較，模型組大鼠血清腎胺酶水平降低，差異有統(tǒng)
計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）；與模型組比較，各給藥組大鼠血清中腎胺酶水平均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （Ｐ
＜０．０５）；其中以高劑量組差異顯著。見表２。
表２ 地龍降壓膠囊對(duì)ＳＨＲ 兒茶酚胺和腎胺酶水平的影響
Ｔａｂｌｅ２ ＴｈｅｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆＤｉｌｏｎｇａｎｔｉｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｃａｐｓｕｌｅｏｎ
量組１２０ ｍｇ／ｋｇ（臨床成人用量的等效劑量）、地龍降壓膠囊高劑量組２４０ ｍｇ／ｋｇ（臨床成人用量等效劑量的２倍）灌胃。模型組給予等體積的蒸餾水灌
ｃａｔｅｃｈｏｌａｍｉｎｅａｎｄｒｅｎａｌａｓｅｉｎＳＨＲ
兒茶酚胺
分組
／（μｇ·Ｌ－１）
ｘ珚±ｓ
腎胺酶
／（μｇ·ｍｌ－１）
胃。另取 ＷＫＹ 雄 性 大 鼠 ８ 只 作 為 正 常 對(duì) 照
（ＷＫＹ 組），給予等體積的蒸餾水灌胃。所有大鼠每日灌胃１次，藥物干預(yù)８周。
１．５ 檢測(cè)指標(biāo)
１．５．１ 一般情況及收縮壓監(jiān)測(cè) 分別于連續(xù)給藥前、給藥后第２周、４ 周、６ 周、８ 周測(cè)定大鼠動(dòng)脈血壓。動(dòng)脈血壓用智能無創(chuàng)血壓計(jì)－鼠儀 ＢＰ－９８Ａ，采用尾套法，給每只大鼠連續(xù)測(cè)量血壓５ 次，取平均值作為測(cè)量結(jié)果。
１．５．２ 樣品采集及處理 干預(yù) ８ 周實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，夜 間禁食，次 日清晨腹腔注射 １０％ 水合氯醛（３ ｍｌ／ｋｇ）麻 醉，心 臟采血 ４ ｍｌ后 分離血清用于血清學(xué)檢測(cè)；脫 頸椎處死后剖腹摘取完整左側(cè)腎臟用４％ 多聚甲醛固定４８ｈ 后行免疫組
ＷＫＹ 組 ７０．９７±１４．４６ ４．３９±０．３４
模型組 １２４．８４±１７．５１１） １．７６±０．２９１）地龍降壓膠囊高劑量組 ９０．０９±１２．４４２） ４．３７±０．２５２）地龍降壓膠囊低劑量組 ９２．５８±１１．８４２） ２．９３±０．５９１）２）
與 ＷＫＹ 組比較，１）Ｐ ＜０．０５；與 模型組比較，２）Ｐ ＜
０．０５。
２．３ 腎臟腎胺酶的表達(dá)
免疫組化顯示，ＷＫＹ 組大鼠腎胺酶在近端小管中高度表達(dá)，也存在于腎小球和遠(yuǎn)端小管中（棕黃色顆粒，以下同地龍降壓膠囊對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠腎胺酶表達(dá)的影響＊
柴輝１ 劉斌１ 李應(yīng)東１ 孫少伯１ 朱貝貝１ 趙信科１ 劉凱１
［摘要］ 目的：觀察地龍降壓膠囊對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠（ＳＨＲ）腎胺酶表達(dá)的影響，以探討地龍降壓膠囊治療原發(fā)性高血壓的作用機(jī)制。方法：?。玻粗唬钢荦g雄性ＳＨＲ，根據(jù)收縮壓隨機(jī)分為模型組 （等容量蒸餾水灌胃）及地龍降壓膠囊高、低劑量組 （分別以地龍降壓膠囊２４０ ｍｇ／ｋｇ、１２０ ｍｇ／ｋｇ 灌胃），每組８ 只。另取８ 只 ＷＫＹ 雄性大鼠作為正常對(duì)照組 （等容量蒸餾水灌胃）。分別于連續(xù)給藥前、給藥后第２ 周、４ 周、６ 周、８ 周測(cè)定尾動(dòng)脈收縮壓。末次給藥后，采用 ＥＬＩＳＡ 法檢測(cè)大鼠血漿兒茶酚胺和血清腎胺酶含量。采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)大鼠腎
臟腎胺酶的表達(dá)。結(jié)果：地龍降壓膠囊有效降低了 ＳＨＲ 收縮壓、血漿兒茶酚胺水平（Ｐ＜０．０５）；升高了 ＳＨＲ 腎胺酶水平（Ｐ＜０．０５）。結(jié)論：地龍降壓膠囊能有效降低血壓，其作用機(jī)制可能是通過調(diào)節(jié)腎胺酶表達(dá)水平，從而影響血漿兒茶酚胺水平實(shí)現(xiàn)的。
［關(guān)鍵詞］ 地龍降壓膠囊；自發(fā)性高血壓大鼠；交感神經(jīng)；腎胺酶；兒茶酚胺
ｄｏｉ：１０．１３２０１／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－１４３９．２０１８．０１．０１５
［中圖分類號(hào)］ Ｒ５４４．１ ［文獻(xiàn)標(biāo)志碼］ Ａ
ＥｆｆｅｃｔｏｆＤｉｌｏｎｇａｎｔｉｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｃａｐｓｕｌｅｏｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆｒｅｎａｌａｓｅｉｎｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｒａｔｓ
ＣＨＡＩＨｕｉ ＬＩＵＢｉｎ ＬＩＹｉｎｇｄｏｎｇ ＳＵＮＳｈａｏｂｏ ＺＨＵＢｅｉｂｅｉ ＺＨＡＯＸｉｎｋｅ ＬＩＵ Ｋａｉ
（ＧａｎｓｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｌａｎｚｈｏｕ，７３００００，Ｃｈｉｎａ）
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＬＩＹｉｎｇｄｏｎｇ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｙｄｊ４１２＠１６３．ｃｏｍ
Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＤｉｌｏｎｇＡｎｔｉｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅＣａｐｓｕｌｅｏｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｒｅｎａｌａｓｅｉｎ ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｒａｔｓ（ＳＨＲ），ａｎｄｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｕｎｄｅｒｌｉｎｇｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｔｈｅ２４ｍａｌｅＳＨＲｓｏｆ８ ｗｅｅｋｓｏｌｄ ｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏ ｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ （ｇａｖａｇｅｏｆｄｉｓｔｉｌｌｅｄ ｗａｔｅｒｏｆｔｈｅｓａｍｅｖｏｌｕｍｅ），ｈｉｇｈｄｏｓｅ ｇｒｏｕｐ，ｌｏｗｄｏｓｅｇｒｏｕｐ（２４０ ｍｇ／ｋｇ，１２０ ｍｇ／ｋｇ），８ｒａｔｓｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ．Ａｎｏｔｈｅｒ８ ＷＫＹ ｍａｌｅｒａｔｓｗｅｒｅｔａｋｅｎａｓ ｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ （ｇａｖａｇｅｏｆｄｉｓｔｉｌｌｅｄ ｗａｔｅｒｏｆｔｈｅｓａｍｅｖｏｌｕｍｅ）．Ｔｈｅｃａｒｏｔｉｄｓｙｓｔｏｌｉｃｂｌｏｏｄｐｒｅｓｓｕｒｅ ｗａｓ ｍｅａｓｕｒｅｄａｔ２ｗｅｅｋｓ，４ｗｅｅｋｓ，６ｗｅｅｋｓａｎｄ８ｗｅｅｋｓａｆｔｅｒｔｈｅｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ．Ａｆｔｅｒｔｈｅｌａｓｔａｄｍｉｎｉｓ－ ｔｒａｔｉｏｎ，ｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆｐｌａｓｍａｃａｔｅｃｈｏｌａｍｉｎｅｓａｎｄｓｅｒｕｍｒｅｎａｌａｓｅｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄｂｙＥＬＩＳＡ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｒｅｎａｌａｓｅ ｉｎＫｉｄｎｅｙ ｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｄｉｌｏｎｇ Ａｎｔｉｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅ Ｃａｐｓｕｌｅｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙｒｅｄｕｃｅｄｔｈｅ
ＳＨＲｓｙｓｔｏｌｉｃｂｌｏｏｄｐｒｅｓｓｕｒｅ，ｐｌａｓｍａｃａｔｅｃｈｏｌａｍｉｎｅｌｅｖｅｌｓ（Ｐ＜０．０５）；ｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆＳＨＲｒｅｎａｌａｓｅ （Ｐ＜ ０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＤｉｌｏｎｇＡｎｔｉｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅＣａｐｓｕｌｅｓｃａｎｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙｒｅｄｕｃｅｂｌｏｏｄｐｒｅｓｓｕｒｅａｎｄｉｔｓｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｍａｙ
ｂｅｔｈｒｏｕｇｈｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｒｅｎａｌａｓｅ，ａｎｄｔｈｅｎａｆｆｅｃｔｉｎｇｐｌａｓｍａｃａｔｅｃｈｏｌａｍｉｎｅｌｅｖｅｌｓ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ Ｄｉｌｏｎｇａｎｔｉｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｃａｐｓｕｌｅ；ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｒａｔｓ；ｓｙｍｐａｔｈｅｔｉｃ；ｒｅｎａｌａｓｅ；ｃａｔｅ－ ｃｈｏｌａｍｉｎｅｓ
高血壓是以動(dòng)脈血壓進(jìn)行性升高為表現(xiàn)的心血管疾病，是心血管疾病重要的危險(xiǎn)因素，致殘率、致死率高。有研究認(rèn)為原發(fā)性高血壓是以交感神經(jīng)過度興奮為起點(diǎn)，引起兒茶酚胺分泌增加，血管收縮，進(jìn) 而發(fā)生高血壓并持續(xù)進(jìn)展［１］。Ｍｉｌａｎｉ等［２］研究發(fā)現(xiàn)腎胺酶可以降解兒茶酚胺，進(jìn)而調(diào)節(jié)
＊ 基金項(xiàng)目：甘肅省自然科學(xué)基金（Ｎｏ：１６１０ＲＪＺＡ０６８）；甘肅中醫(yī)藥大學(xué)研究生創(chuàng)新基金（Ｎｏ：ＣＸ２０１６－０８）
１ 甘肅中醫(yī)藥大學(xué)（蘭州，７３００００）
通信作者：李應(yīng)東，Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｙｄｊ４１２＠１６３．ｃｏｍ
血壓。地龍降壓膠囊是甘肅中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院的院內(nèi)制劑，在臨床使用中對(duì)高血壓有較好的治療 效果，但是在對(duì)其作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究較少，尚未 發(fā)現(xiàn)有涉及其對(duì)交感神經(jīng)系統(tǒng)的作用。本研究通過觀察地龍降壓膠囊對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠（ＳＨＲ）血漿兒茶酚胺濃度以及血清腎胺酶水平變化的影響，探討地龍降壓膠囊的降壓作用與影響腎胺酶表 達(dá)水平的關(guān)系，為其治療高血壓提供理論基礎(chǔ)和實(shí) 驗(yàn)依據(jù)。
ＣＨＡＩＨｕｉ，ｅｔａｌ．ＥｆｆｅｃｔｏｆＤｉｌｏｎｇａｎｔｉｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｃａｐｓｕｌｅｏｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｒｅｎａｌａｓｅｉｎＳＨＲｓ
·６７·
１ 材料與方法
１．１ 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
２４只ＳＨＲ 和８只 ＷＫＹＳＰＦ 級(jí)大鼠，８ 周齡，雄性，購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司， 許可證編號(hào)：ＳＣＸＫ （京）２０１２－０００１。
１．２ 實(shí)驗(yàn)藥物與試劑
受試藥物：地 龍降壓膠囊（甘 肅中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，批號(hào)：１５１０２６）；試劑：水合氯醛（天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所，批 號(hào)：２０１５０１０５）；４％多聚 甲 醛 （北 京 索 萊 寶 科 技 有 限 公 司，批 號(hào)： ２０１６０４２９）；ＲａｔＣＡ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ９６Ｔ（上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司，批 號(hào)：２０１６０５）；ＲｂａＲｅｎａｌａｓｅ
（北 京 博 奧 森 生 物 技 術(shù) 有 限 公 司，批 號(hào)：ＡＣ ０６０３１７５７）。
１．３ 實(shí)驗(yàn)儀器
智能無創(chuàng)血壓計(jì)－鼠儀 ＢＰ－９８Ａ（北京軟隆生物技術(shù)有限公司）；ＪＭ－Ａ５００２ 型電子天平（諸暨市超澤衡器設(shè)備有限公司）；高 速低溫離心機(jī) （德 國Ｈｅｒａｅｕｓ公司）；微型混合器（金壇市恒豐儀器廠）； Ｉｎｆｉｎｉｔｅ２００ＰＲＯ 序列多功能酶標(biāo)儀（Ｔｅｃａｎ 奧地利有限責(zé)任公司）；ＺＷＹＲ－２４０ 恒溫培養(yǎng)振蕩器（上海智城分析儀器有限公司）；ＥＧ１６００ 型包埋儀（德 國 Ｌｅｉｃａ 公司）；ＲＭ ２１３５ 型切片機(jī) （德 國 Ｌｅｉｃａ公司）；ＯＬＹＭＰＵＳＢＸ５ 顯微鏡（日本 Ｏｌｙｍ－ ｐｕｓ 珠式會(huì)社）。
１．４ 動(dòng)物分組及給藥
取８周齡雄性ＳＨＲ２４只和８周齡雄性 ＷＫＹ大鼠８只，適應(yīng)性喂養(yǎng)１ 周后，用智能無創(chuàng)血壓計(jì)－ 鼠儀ＢＰ－９８Ａ 測(cè)量 ＳＨＲ 收縮壓，根據(jù)收縮壓值查隨機(jī)數(shù)字表，隨機(jī)分為３ 組：模型組、地龍降壓膠囊低劑量組、地龍降壓膠囊高劑量組，每組８ 只。地龍降壓膠囊干預(yù)組，分別以每日地龍降壓膠囊低劑
化檢測(cè)。
１．５．３ 指標(biāo)檢測(cè) 血漿兒茶酚胺（ＣＡ）、血清腎胺酶（ｒｅｎａｌａｓｅ）水平測(cè)定采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)，嚴(yán)格按照試劑盒說明進(jìn)行操作。
１．６ 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
采用ＳＰＳＳ２０．０ 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。數(shù)據(jù)結(jié)果符合正態(tài)分布以ｘ珚±ｓ 表示，定量資料多組間兩兩比較采用方差分析 （方差齊的采用 ＬＳＤ 檢驗(yàn)，
方差不齊者采用 Ｄｕｎｎｅｔｔ'ｔ檢驗(yàn)），以 Ｐ＜０．０５ 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
２ 結(jié) 果
２．１ 地龍降壓膠囊對(duì)ＳＨＲ 收縮壓的影響
與 ＷＫＹ 組比較，模型組大鼠收縮壓隨鼠齡增
加逐漸升高（Ｐ＜０．０５）；與模型組相比，隨著給藥時(shí)間的延長，地龍降壓膠囊高劑量組給藥第４ 周收縮
壓下降有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（Ｐ＜０．０５），地龍降壓膠囊低劑量組給藥第６ 周收縮壓下降有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 （Ｐ＜ ０．０５）；地龍降壓膠囊高、低劑量組之間的差異無統(tǒng)
計(jì)學(xué)意義（Ｐ＞０．０５）。見表１。
２．２ 地龍降壓膠囊對(duì)ＳＨＲ 血漿兒茶酚胺水平、血
清腎胺酶水平的影響
與 ＷＫＹ 組比較，模型組大鼠血漿兒茶酚胺水
平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）；與模型組比較，地龍降壓膠囊高、低劑量組大鼠血漿兒茶酚胺
水平均降低（Ｐ＜０．０５）。給藥８ 周后，與 ＷＫＹ 組比較，模型組大鼠血清腎胺酶水平降低，差異有統(tǒng)
計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）；與模型組比較，各給藥組大鼠血清中腎胺酶水平均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （Ｐ
＜０．０５）；其中以高劑量組差異顯著。見表２。
表２ 地龍降壓膠囊對(duì)ＳＨＲ 兒茶酚胺和腎胺酶水平的影響
Ｔａｂｌｅ２ ＴｈｅｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆＤｉｌｏｎｇａｎｔｉｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｃａｐｓｕｌｅｏｎ
量組１２０ ｍｇ／ｋｇ（臨床成人用量的等效劑量）、地龍降壓膠囊高劑量組２４０ ｍｇ／ｋｇ（臨床成人用量等效劑量的２倍）灌胃。模型組給予等體積的蒸餾水灌
ｃａｔｅｃｈｏｌａｍｉｎｅａｎｄｒｅｎａｌａｓｅｉｎＳＨＲ
兒茶酚胺
分組
／（μｇ·Ｌ－１）
ｘ珚±ｓ
腎胺酶
／（μｇ·ｍｌ－１）
胃。另取 ＷＫＹ 雄 性 大 鼠 ８ 只 作 為 正 常 對(duì) 照
（ＷＫＹ 組），給予等體積的蒸餾水灌胃。所有大鼠每日灌胃１次，藥物干預(yù)８周。
１．５ 檢測(cè)指標(biāo)
１．５．１ 一般情況及收縮壓監(jiān)測(cè) 分別于連續(xù)給藥前、給藥后第２周、４ 周、６ 周、８ 周測(cè)定大鼠動(dòng)脈血壓。動(dòng)脈血壓用智能無創(chuàng)血壓計(jì)－鼠儀 ＢＰ－９８Ａ，采用尾套法，給每只大鼠連續(xù)測(cè)量血壓５ 次，取平均值作為測(cè)量結(jié)果。
１．５．２ 樣品采集及處理 干預(yù) ８ 周實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，夜 間禁食，次 日清晨腹腔注射 １０％ 水合氯醛（３ ｍｌ／ｋｇ）麻 醉，心 臟采血 ４ ｍｌ后 分離血清用于血清學(xué)檢測(cè)；脫 頸椎處死后剖腹摘取完整左側(cè)腎臟用４％ 多聚甲醛固定４８ｈ 后行免疫組
ＷＫＹ 組 ７０．９７±１４．４６ ４．３９±０．３４
模型組 １２４．８４±１７．５１１） １．７６±０．２９１）地龍降壓膠囊高劑量組 ９０．０９±１２．４４２） ４．３７±０．２５２）地龍降壓膠囊低劑量組 ９２．５８±１１．８４２） ２．９３±０．５９１）２）
與 ＷＫＹ 組比較，１）Ｐ ＜０．０５；與 模型組比較，２）Ｐ ＜
０．０５。
２．３ 腎臟腎胺酶的表達(dá)
免疫組化顯示，ＷＫＹ 組大鼠腎胺酶在近端小管中高度表達(dá)，也存在于腎小球和遠(yuǎn)端小管中（棕黃色顆粒，以下同）。模型組大鼠腎胺酶在近端小管、遠(yuǎn)端小管、腎小球表達(dá)較 ＷＫＹ 組明顯減少；地龍降壓膠囊各劑量組與模型組比較，腎胺酶表達(dá)均有不同程度增加。見圖１。
）。模型組大鼠腎胺酶在近端小管、遠(yuǎn)端小管、腎小球表達(dá)較 ＷＫＹ 組明顯減少；地龍降壓膠囊各劑量組與模型組比較，腎胺酶表達(dá)均有不同程度增加。見圖１。