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實驗筆記｜ELISA實驗“花板”了怎么辦?
閱讀：630 發布時間：2022-5-9酶聯免疫的原理是抗原或者抗體的固相化及抗原抗體的酶標記，加入酶反應底物后，底物被*催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，由此進行定量或定性的分析。實驗的特異性和靈敏度較高，操作也簡單，可大批量操作而廣泛應用于多種傳染病的篩查。然而，由于「花板」現象的出現，會給實驗結果的判讀和分析帶來麻煩。「花板」，就是空白、陽性、陰性對照及室內質控孔結果正常，而樣本孔的 OD 值偏高，弱陽性的結果偏多。以下，是關于花板原因的一些分析。
1、花板的原因大多在在樣本
花板，就是空白、陰陽性對照及室內質控空結果正常，而樣本孔 OD 值偏高。之所以空白、對照及質控孔的結果正常而樣本孔的結果異常,是因為樣本本身的原因，大部分或者全部的樣本孔的 OD 值偏高，很可能是因為樣品中某些共有的物質非特異性的吸附于固相載體，而在實驗過程中并未除去。
2、洗滌的作用
聚苯烯因其具有較強的吸附蛋白質的性能而被廣泛用于 Elisa 實驗的固相載體，聚苯烯塑料對蛋白質的吸附作用是具有普遍性，因此需要通過洗滌排除在實驗過程中的非特異性地吸附在固相載體上的干擾物質。
3、孵育時間過長也會造成花板現象
樣本過多會導致樣本在室溫停留時間增多，進而加長了孵育的時間，蛋白質非特異性吸附于固相載體。
為了避免“花板"問題的出現，降低檢測的假陽性率，獲得更理想的實驗結果，在檢測過程中應采取下列措施：
1.在選擇ELISA試劑時，應選擇靈敏度高、特異性好、穩定性好、批間差小、操作方便、省時的試劑,如恒遠生物高敏elisa試劑盒。
2.在所有標本進行檢測的過程中，所用的儀器及加樣過程都處于正常狀態的情況下，步驟均按照各種試劑說明書的要求去做，排除實驗所用儀器和操作步驟對實驗結果的影響。
3.血液標本應置于室溫下1-2h，使血液凝固收縮，然后離心檢測或讓血液過夜后再檢測。這樣才能使得血液充分收縮，讓標本中的非特異性物質所致的假陽性率降至低。
4.檢測加大離心轉速，盡量延長時間，使血細胞和纖維蛋白充分沉淀，讓血細胞與血清*分離。
5.加樣時不能加入紅細胞或纖維蛋白，要按照操作說明書去做，否則會影響實驗結果。
6.對于血清中存在的紅細胞或纖維蛋白原，可以在加樣離心時得到控制，同樣也可以通過適當增加洗滌次數和浸泡時間來進步減輕或避免對實驗結果的影響。同樣，對于血液存在的非特異性的IgG，增加洗滌次數和延長浸泡時間也同樣有效。
7.封板溫育時，各孔定要封嚴，防止陽性標本的液體蒸發，產生周邊現象從而導致“花板"的出現。
8.孵育時間過長，增加了固相載體吸附非特異性蛋白的可能性，也會造成“花板"。因此，除把握孵育時間外，在加樣過程中也應嚴格控制時間，標本較多時可分批操作。
9.手工洗板時應注意液體被濺出或孔與孔之間的液體溢出，連成整體液面后產生“花板"。
10.用洗板機洗板時應防止針口有纖維蛋白或異物，這些異物在洗板的過程中易產生拖帶現象而導致“花板"的出現。