人（Human）腫瘤壞死因子a（TNF-a）ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
　　
　　本試劑僅供研究使用標(biāo)本：血清或血漿
　　
　　試驗(yàn)原理：
　　
　　TNF-α試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知TNF-α濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將TNF-α和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中TNF-α的濃度呈比例關(guān)系。
　　
　　試劑盒內(nèi)容及其配制
　　
　　試劑盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制
　　
　　96/48人份酶標(biāo)板1塊板（96T）半塊板（48T）即用型
　　
　　塑料膜板蓋1塊半塊即用型
　　
　　標(biāo)準(zhǔn)品：400pg/ml1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀稀
　　
　　空白對(duì)照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型
　　
　　標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型
　　
　　生物素標(biāo)記的抗TNF-α抗體1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型
　　
　　親和鏈酶素-HRP1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型
　　
　　洗滌緩沖液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋
　　
　　底物A1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型
　　
　　底物B1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型
　　
　　終止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型
　　
　　人（Human）腫瘤壞死因子a（TNF-a）ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
　　
　　自備材料
　　
　　1．蒸餾水。
　　
　　2．加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
　　
　　3．振蕩器及磁力攪拌器等。
　　
　　安全性
　　
　　1．避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗。
　　
　　2．實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
　　
　　3．不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
　　
　　操作注意事項(xiàng)
　　
　　1．試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
　　
　　2．實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
　　
　　3．不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
　　
　　4．使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。
　　
　　5．使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
　　
　　6．洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
　　
　　7．底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
　　
　　8．加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
　　
　　9．按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
　　
　　樣品收集、處理及保存方法
　　
　　1、血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
　　
　　2、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
　　
　　3、細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
　　
　　4、保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
　　
　　試劑的準(zhǔn)備
　　
　　1．標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋?xiě)?yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備，不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行：
　　
　　400pg/ml（6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
　　
　　200pg/ml（5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
　　
　　100pg/ml（4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
　　
　　50pg/ml（3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
　　
　　25pg/ml（2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
　　
　　12.5pg/ml（1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
　　
　　0pg/ml（空白對(duì)照）原始濃度不用稀釋直接加入50ul。
　　
　　2．洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。
　　
　　操作步驟
　　
　　1．使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
　　
　　2．根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
　　
　　3．加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí)。
　　
　　4．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
　　
　　5．每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
　　
　　6．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
　　
　　7．每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
　　
　　8．取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。
　　
　　9．在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
　　
　　建議使用的實(shí)驗(yàn)方案
　　
　　標(biāo)準(zhǔn)品濃度（pg/ml）
　　
　　A400400樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
　　
　　B200200樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
　　
　　C100100樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
　　
　　D5050樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
　　
　　E2525樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
　　
　　F12.512.5樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
　　
　　G00樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
　　
　　H樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
　　
　　人（Human）腫瘤壞死因子a（TNF-a）ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
　　
　　局限
　　
　　6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無(wú)法得到的結(jié)果。
　　
　　試劑盒性能
　　
　　1.靈敏度：zui小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
　　
　　2.特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
　　
　　3.重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
　　
　　結(jié)果判斷與分析
　　
　　1、儀器值：于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
　　
　　2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的TNF-α標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的TNF-α含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。
　　
　　3、檢測(cè)值范圍：0-400pg/ml
　　
　　4、敏感度：1.0pg/ml
　　
　　植物維生素D（VD）ELISA試劑盒PlantVitaminD,VDELISA試劑盒
　　
　　植物維生素B6（VB6）ELISA試劑盒PlantVitaminB6,VB6ELISA試劑盒
　　
　　植物25羥基維生素D3（25（OH）D3/25HVD3）ELISA試劑盒Plant25-DihydroxyvitaminD3,HVD3ELISA試劑盒
　　
　　植物維生素C（VC）ELISA試劑盒PlantHumanVitaminC,VCELISA試劑盒
　　
　　α-銀環(huán)蛇毒素（α-BGT）ELISA試劑盒α-bungarotoxin,α-BGISA試劑盒
　　
　　大腸桿菌宿主殘留蛋白（E.coliP）ELISA試劑盒EscherichiacoliProtein,E.coliPELISA試劑盒
　　
　　黃曲霉毒素（AFT）ELISA試劑盒Aflatoxin,AFISA試劑盒
　　
　　蘇云金芽孢桿菌蛋白（BT）ELISA試劑盒Bacillusthuringiensis,BISA試劑盒
　　
　　牛丙酮檢測(cè)（acetone）ELISA試劑盒BovineacetoneELISA試劑盒
　　
　　魚(yú)類(lèi)白介素1αIL-1αELISA試劑盒
　　
　　魚(yú)類(lèi)白介素1βIL-1βELISA試劑盒
　　
　　鯉魚(yú)卵黃蛋白原VTGELISA試劑盒
　　
　　魚(yú)類(lèi)促性腺激素釋放激素GnRHELISA試劑盒