小鼠真皮微血管內皮細胞

| 商品屬性：

| 細胞介紹：

小鼠真皮微血管內皮分離自真皮組織；真皮，位于表皮深層，向下與皮下組織相連，真皮結締組織的膠原纖維和彈性纖維互相交織在一起，埋于基質內。其內分布著各種結締組織細胞和大量的膠原纖維彈性纖維，使皮膚既有彈性，又有韌性。其由兩層組成——乳頭層與網(wǎng)狀層。真皮的結構組成是膠原蛋白、彈性纖維以及基質。微血管內皮細胞（MEC）在炎癥反應、腫瘤生長、創(chuàng)面愈合過程中起著非常重要的作用。在創(chuàng)面愈合研究領域，由于表皮細胞、真皮成纖維細胞體外培養(yǎng)技術的成熟，人們對這兩種細胞早已進行了大量深入的研究。與之相比，對參與創(chuàng)面愈合過程的另一種主要細胞——真皮微血管內皮細胞，則因其體外分離培養(yǎng)技術的困難而使相關的研究受限。

| 方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠真皮微血管內皮采用膠原酶-混合消化法結合密度梯度離心法、后通過內皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

| 質量檢測：

公司實驗室分離的小鼠真皮微血管內皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

| 培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 內皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

| 細胞培養(yǎng)操作：

1）復蘇細胞：將含有細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

| 注意事項：

1. 收到非紅系有核細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn) 象發(fā)生請及 時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所 需細胞因子 等，確保細胞培養(yǎng)條件*。若由于培養(yǎng)條件不*而導致細胞出現(xiàn)問 題，責任由客戶自行承擔。

3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題貼壁細胞會有少量 從瓶 壁脫落，將細胞置于培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng) 4~6 小時,再取出觀察。此時多數(shù)細胞均 會貼壁，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍 染色測定細胞活力，如果證實細胞活力正常， 請將細胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結果顯示細胞無活 力，請拍下 照片及時和我們聯(lián)系，信息確認后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次。

4. 靜置細胞貼壁后，請將細胞瓶內的培養(yǎng)基倒出，留 6~8mL 維持細胞正常培養(yǎng)，待ATCC CRL-1711(Sf9)細 胞匯 合度  80%左右時正常傳代。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內多余的培養(yǎng)基可收集備用，細胞 傳代時可以 一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細胞逐漸適應培養(yǎng)條件。

6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和 技術 部 溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián) 系，告知細胞的具體情況，以便我們 的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7.該細胞僅供科研使用。

| 公司正在出售的產品

大鼠雌激素受體(ER)試劑盒 ，英文名： ER ELISA Kit

Mouse aminoterminal propeptide of type III procollagen (P III ) ELISA Kit 小鼠Ⅲ型前膠原氨基端肽(PⅢ)試劑盒

ELISA 小鼠C反應蛋白(mouse CRP)  進口分裝

CLIAKitforLH促黃體生成素

通用型HPV6(HUMANPAPILLOMAVIRUS-6)病毒定量PCR擴增試劑盒20次

ELISAKitBNP腦素/腦尿肽

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兔肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)試劑盒   96T/48T

兔環(huán)0酸腺苷(cAMP)試劑盒   96T/48T

兔核因子κB受體活化因子配基（RANKL）試劑盒   96T/48T

G蛋白偶聯(lián)受體GPRC5C蛋白抗體

小鼠D-乳酸(D-LAC)試劑盒 96T/48T

Rat vitamin C (VC) ELISA Kit 大鼠C(VC)試劑盒

HumanDehydroepiandrosteroneS7,DHEA-S7ELISAKit 人脫輕表雄酮S7(DHEA-S7)試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanColonCancerAigen,CCA試劑盒人結腸癌抗原(CCA)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織AMPK激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

Humanpyruvatekinase,PKELISAKit人同酸激酶(PK)試劑盒規(guī)格：96T/48T

甘油磷酸二酯酶磷酸結構域4抗體

ACP5重組小鼠 ACP5 / TRAP 蛋白 Protein

CAP2(Adenylyl cyclase-associated protein 2 0.5mgCAP2(Adenylyl cyclase-associated protein 2) 環(huán)化酶相關蛋白CAP-2抗原

TYRP1重組人 TRP1 / TYRP1 蛋白 Protein

HRAS Protein Human 重組人 HRAS / GTPase Hras 蛋白

PROM1 Protein Rat 重組大鼠 CD133 / PROM1 / Prominin 1 蛋白 (Fc 標簽)

小鼠真皮微血管內皮細胞CAP2(Adenylyl cyclase-associated protein 2 0.5mgCAP2(Adenylyl cyclase-associated protein 2) 環(huán)化酶相關蛋白CAP-2抗原

HRAS Protein Human 重組人 HRAS / GTPase Hras 蛋白

ACP5重組小鼠 ACP5 / TRAP 蛋白 Protein

PROM1 Protein Rat 重組大鼠 CD133 / PROM1 / Prominin 1 蛋白 (Fc 標簽)

TYRP1重組人 TRP1 / TYRP1 蛋白 Protein