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小鼠顱蓋成纖維細胞;OP9培養(yǎng)細胞株培養(yǎng)的無菌技術(shù)要點

時間:2021/6/23閱讀:323
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小鼠顱蓋成纖維細胞;OP9培養(yǎng)細胞株培養(yǎng)的具體無菌技術(shù)要點:
1. 實驗開始前,無菌室和無菌操作臺需要紫外光照射30到60分鐘*滅菌,用70%ethanol擦拭無菌操作臺面,并且打開無菌操作臺風(fēng)扇運行10分鐘之后,才可以進行實驗操作。每次操作只能處理一株細胞株,即使培養(yǎng)基*相同也不可共用培養(yǎng)基,以避免細胞間污染或失誤混淆。實驗完成后,請將實驗物品拿出工作臺,用70%ethanol再次擦拭無菌操作臺面。操作間隔應(yīng)該讓無菌操作臺運轉(zhuǎn)10分鐘到15分鐘后,才能進行下一個細胞株的操作。
2. 無菌操作工作的區(qū)域應(yīng)保持清潔和寬敞,必要物品(試管架、吸管、吸取器或吸管盒等)可以暫時放置,其它實驗用品使用完畢后應(yīng)移出,有利于空氣流通。實驗用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無菌操作臺內(nèi)。實驗操作過程應(yīng)在臺面的中央無菌區(qū)域內(nèi)完成,請勿在邊緣非無菌區(qū)域進行操作。
3. 小心取用無菌實驗物品,避免細菌污染。請勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處,也不要在打開的容器正上方進行操作。容器打開后,請用手夾住瓶蓋并輕握瓶身,傾斜大約45°角取用,盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。
4. 工作人員應(yīng)當(dāng)首先注意自身安全,必須穿戴齊實驗衣和實驗手套后才能進行實驗。對于病毒感染或是來自人類的細胞株應(yīng)當(dāng)特別小心操作,并選擇適當(dāng)?shù)燃壍臒o菌操作臺進行(至少是Class II)。操作過程中,應(yīng)避免引起aerosol的產(chǎn)生,小心有毒性藥品,例如DMSO和TPA等,并避免針頭的傷害等等。
5. 定期檢測下列項目:
5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力
5.2. CO2培養(yǎng)箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染(水盤的水需用無菌水,每周定時更換)。
5.3. 無菌操作臺內(nèi)的airflow壓力,定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜,預(yù)濾網(wǎng)(300小時/預(yù)濾網(wǎng),3000小時/HEPA)。
6. 水槽內(nèi)可添加消毒劑(Zephrin 1:750),需定期更換水槽中的水。

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