纖維素酶（CL）檢測試劑盒說明書，注意：正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定。

貨號：YX-C-B610 

規(guī)格：50T/24S

產(chǎn)品說明：

CL（EC 3.2.1.4）存在于細(xì)菌、真菌和動物體內(nèi)，能夠催化纖維素降解，是一類可廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、棉紡、環(huán)保及可再生資源利用等領(lǐng)域的酶制劑。采用3.5－二硝基水楊酸法測定CL催化纖維素降解產(chǎn)生的還原糖的含量。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體 50mL×1 瓶，4℃保存； 

試劑一：液體 4mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：液體 10mL×1 瓶，4℃保存； 

試劑三：液體 13mL×1 瓶，4℃保存；

標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1 支，4℃保存，含 10mg 無水葡萄糖（干燥失重<0.2%），臨用前加入 1mL 蒸餾水溶解，配制成 10mg/mL 葡萄糖溶液備用，4℃可保存 1 周，或者用飽和苯甲酸溶液溶解，可保存更長時間。

標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：將標(biāo)準(zhǔn)品用蒸餾水稀釋至 1、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1、0mg/mL。

纖維素酶（CL）檢測試劑盒操作步驟：

一、樣品測定的準(zhǔn)備：

1、細(xì)菌或細(xì)胞：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液，超聲冰浴破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率 20％，超聲 3S 秒，間隔 10S，重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

纖維素酶（CL）檢測試劑盒混勻，540nm 處蒸餾水調(diào)零，測定吸光值 A，樣品管計算ΔA=A 測定管-A 對照管。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立：540nm 處以標(biāo)準(zhǔn)管 0mg/mL 調(diào)零，讀標(biāo)準(zhǔn)管吸光值 A。以濃度（y）為縱坐標(biāo)，吸光度 A（x）為橫坐標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

CL 活力計算：

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，將ΔA 帶入公式中（x）計算樣品濃度 y（mg/mL）。

1、按照蛋白濃度計算

單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生 1μg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。

CL 活力（U /mg prot）＝1000×y×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T=233×y÷Cpr 

2、按樣本鮮重計算

單位的定義：每 g 組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生 1μg  葡萄糖定義為一個酶活力單位。

CL 活力（U/g 鮮重）＝1000×y×V 反總÷（W×V 樣÷V 樣總）÷T =233×y÷W 

3、按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算

纖維素酶（CL）檢測試劑盒單位的定義：每1 萬個細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1μg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。CL 活 力 （U/104 cell）＝1000×y×V 反 總 ÷（500×V 樣 ÷V 樣 總 ）÷T =0.467×y 1000：1mg/mL=1000μg/mL；V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.35mL； V 樣：加入樣本體積，0.05 mL； V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間，30 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬