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閱讀:242發(fā)布時(shí)間:2019-01-18
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大鼠 MTL elisa檢測(cè)試劑盒 實(shí)驗(yàn)原理:
將目標(biāo)抗體包被于96孔微孔板中,制成固相載體,向微孔中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)本,其中的目標(biāo)連接于固相載體上的抗體結(jié)合,然后加入微生物化的目標(biāo)抗體,將未結(jié)合的*抗體洗凈后,加入HRP標(biāo)記和親和素,再次*洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的目標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(O.D.值),計(jì)算樣品濃
1. 實(shí)驗(yàn)前 20 分鐘從冰箱中取出試劑盒,以平衡至室溫(20-25℃);
2. 取出所需數(shù)量的板條,其余密封放回 4℃;
3. 建立標(biāo)準(zhǔn)曲線:設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔 8 孔,每孔中各加入樣品稀釋液 100ul,一孔加標(biāo)準(zhǔn)品 100nl,混勻后用加樣器吸出 100ul,移至第二孔。如此反復(fù)對(duì)倍稀釋至第七孔,,從第七孔中吸出 100ul 棄去,使之體積均為 100ul。第八孔為空白對(duì)照;
4. 加樣:待測(cè)品孔中每孔加入待測(cè)樣品 100ul;
5. 將反應(yīng)板置 37℃120 分鐘;
6. 洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次,向?yàn)V紙上印干;
7. 每孔中加入一抗體工作液 50ul;
8. 將反應(yīng)板充分混勻后置 37℃60 分鐘。
9. 洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次,向?yàn)V紙上印干;
10. 每孔加酶標(biāo)抗體工作液 100uL. 11. 將反應(yīng)板置 37℃60 分鐘。
12. 洗板:同前。
13. 每孔加入底物液 100uL,置 37℃暗處反應(yīng) 5-10 分鐘。
14. 每孔加入 50uL 終止液混勻。
15. 在 450nm 處測(cè)吸光值。(應(yīng)盡快,時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能導(dǎo)致本底偏高)
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