古朵快訊：免疫組化安排樣本的處理辦法

　　安排處理

　　恰當的安排處理是做好免疫組化染色的先決條件，也是決議染色勝敗的內部因素，在安排細胞材料預備的過程中，不只要求堅持安排細胞形狀完整，更要堅持安排細胞的抗原性不受損或充滿，避免安排自溶。如果呈現自溶壞死的安排，抗原現已丟掉，即運用很活絡的檢測抗體和高明的技能，也很難檢出所需的抗原，反而往往由于安排的壞死或制片時的刀痕擠壓，在上述區域易呈現假陽性成果。

　　1) 安排及時選材和固定

　　安排標本及時的選材和固定是做好免疫組化染色的要害*步，是有用避免安排自溶壞死，抗原丟掉的開始，離體安排應趕快的進行選材，2h內，選材時所用的刀應鋒利，要一刀下去切開安排，不行重復切拉安排，形成安排的擠壓，安排塊巨細要適中，一般在2.5cm×2.5cm×0.2cm，牢記選材時安排塊寧可面積大，千萬不能厚的準則，(也就是說安排塊的面積能夠大到3cm×5cm，但安排塊的厚度千萬不能超越0.2cm，不然將晦氣于安排的均勻固定)。固定液快速滲透到安排內部使安排蛋白能在一定時刻內敏捷凝結。然后無缺的保存抗原和安排細胞形狀。

　　對于固定液的選擇，準則上講，應根據抗原的耐受性來選擇相應的固定液，但除非是專項科研項目，在病理慣例作業很難做到這一點，由于病理的確診和辨別確診都是在慣例HE病理確診的基礎上決議是否進行免疫組化的染色，而HE染色的慣例安排處理是采用10%的中性緩沖福爾馬林或4%緩沖多聚甲醛4倍于安排體積進行安排固定，使用其滲透性強，對安排的作用均勻進行固定，但安排固定時刻在l2h內，一般固定時刻不應超越24小時。隨著固定時刻的延伸對安排抗原的檢出強度將逐步下降。

　　2) 安排脫水、通明、浸蠟

　　安排經固定后進行脫水、通明、浸蠟和包埋。把握的準則是脫水通明要充分但不能過，浸蠟時刻要夠，溫度不能高，不然形成安排的硬脆使安排切片困難，即使能切片，由于安排的硬脆，也使切片不能無缺平整，染色過程中極易脫片，對免疫組化染色抗原的定位及布景都晦氣，所以*脫水和二甲苯通明的時刻不宜過長，正常巨細的安排*脫水lh×3次，二甲苯通明lh×2次即可，浸蠟及包埋白臘溫度不要超越65℃。

　　(一)標本的主要來源

　　1.活體組織：應取材于病變組織及病變與正常組織交界處，大小適中。減少對組織標本的損傷與擠壓。

　　2.體液、穿刺液：可直接涂片或經離心后取沉淀物涂片。

　　3.培養細胞：懸浮培養的細胞經離心沉淀后做細胞涂片，蓋玻片上的單層培養細胞直接固定。

　　(二)標本的固定與保存

　　1.標本固定的目的：使細胞內蛋白質凝固，細胞內分解酶反應終止，以防止細胞自溶，保持細胞形態和結構;保存組織細胞抗原性;防止標本脫落;除去妨礙抗體結合的類脂，便于保存;抑制組織中細菌的繁殖，防止組織腐敗和在后續組織制備中的細胞結構和成分的改變。標本的固定應以不損傷細胞形態，不干擾固定后抗原的識別和結合為原則。

　　2.固定劑的選擇：蛋白質類抗原，可用乙醇或甲醇固定;微生物抗原可用丙酮或三氯化碳固定;如需除去病毒的蛋白質外殼，可使用y蛋白酶;多糖類抗原用10%福爾馬林固定或以微火加熱固定;如有黏液物質存在，應用透明質酸酶等處理除去;類脂質豐富的組織進行蛋白、多糖抗原檢測時，需用有機溶劑(乙m、丙酮等)處理除去類脂。組織標本常規固定液為中性緩沖甲醛。

　　3.制片方法的評價：冷凍和石蠟切片是免疫組化常用的制片方法。選冷凍切片。其操作簡便，可避免石蠟切片因固定(甲醛)、脫水、浸蠟等對抗原所造成的損失，適用于不穩定的抗原。石蠟切片是研究形態學的主要制片方法，它不但是觀察組織細胞結構的理想方法，而且可用在陳舊石蠟包埋材料免疫組化的回顧性研究。切片薄而有連續性，可長期保存。但對抗原的保存不如冷凍切片。

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