古朵小課堂：多色免疫熒光為什么也叫做多重免疫組化?

　　  多色熒光免疫組化

　　  多靶標(biāo)免疫組化研究全套解決方案

　　  多靶點標(biāo)記技術(shù)旨在同一張切片上同時檢測多個靶標(biāo)分子，從而進行不同靶標(biāo)之間共表達(dá)和共定位分析、豐度檢測、異質(zhì)性分析、細(xì)胞表型統(tǒng)計以及復(fù)雜的組織微環(huán)境描述等。

　　  該技術(shù)是基于TSA(Tyramide Signal Amplification )酪胺信號放大技術(shù)的組織切片多重標(biāo)記方案，利用辣根過氧化酶(HRP)對靶蛋白或核酸進行高密度原位標(biāo)記，提高檢測的靈敏度，大幅提高信噪比甚至達(dá)千倍以上。它可使用同一動物來源的一抗，進行同一組織切片上多種marker的熒光多重標(biāo)記。同時由于具有的信號放大性能，它可將信號強度完成10-100倍的信號提升，大大提高對于弱信號及不易標(biāo)記的蛋白的探測靈敏度。

　　  Multiplex IHC，簡稱mIHC，直譯多重免疫組化，也叫多重?zé)晒饨M化、多色免疫熒光、熒光多色標(biāo)記等，到底是組化還是熒光?初次接觸的人有些懵，下面就要從它的原理給大家解釋下，為什么呈現(xiàn)的是熒光圖像而同時我們又稱之為組化又沒錯,要想充分明白這個問題，我們從以下幾個方面來解釋：

　　  1-mIHC的基本原理

　　  mIHC實驗是基于使用酪胺-熒光基團檢測開發(fā)的。其實驗步驟使用序列標(biāo)記策略，每輪標(biāo)記包含一抗孵育和二抗孵育。隨后是酪胺-熒光基團偶聯(lián)物沉淀。接下來將抗體hrp剝離，或在微波爐或者高溫中加熱，去除樣本中的抗體，所有沉淀的熒光基團，仍與樣本共價結(jié)合。mIHC的基本原理：內(nèi)源性過氧化物酶封閉--抗原修復(fù)--一抗孵育--hrp二抗--顯色(熒光顯色沉淀)，由此可見，這基本就是免疫組化的經(jīng)典原理;只不過mIHC重復(fù)了組化的兩次(雙標(biāo)) 三次(三標(biāo))甚至六次(六標(biāo)七色)，后一步再做個負(fù)染dapi(類似于組化的蘇木素負(fù)染)!

　　  2-為什么使用多重而非單染色IHC?

　　  如果您的研究方向是探索不同細(xì)胞類型之間的交互作用，或者需要評價多個生物標(biāo)志物和組織的表達(dá)或共定位，可以使用mIHC實驗。

　　  3-mIHC實驗的抗體使用

　　  使用經(jīng)過高度驗證的抗體，確保得到可靠的結(jié)果。通常而言經(jīng)過IHC-P驗證的抗體，同樣也能在mIHC中使用，但需要再進行實驗步驟優(yōu)化。

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