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人轉(zhuǎn)錄因子E2F1試劑盒激活方法與檢測(cè)程序方法
人轉(zhuǎn)錄因子E2F1試劑盒激活方法:
1. 將450ul 標(biāo)本稀釋液加入到一支 1.5ml 進(jìn)口聚丙烯管中 , 再加 10ul 血清或血漿標(biāo)本。
2. 加20ul 1 N HC I ,蓋緊,上下混勻。 2 - 8 ℃ 放置60± 2 分鐘。
3. 加20ul 1 N NaOH, 蓋緊,上下混勻。
4. 即用,或放-20/-70 ℃ 保存3 天。計(jì)算結(jié)果時(shí)乘 以稀釋倍數(shù) 50 。 ( 注意:不同的標(biāo)本E2F1 的水平可能有較大差異,請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況靈活掌握稀釋度)
5. 細(xì)胞培養(yǎng)上清或組織勻漿 10 倍稀釋 (410ul 的標(biāo)本稀釋液+ 50ul 樣本+ 20ul 的 1N HCI+20ul 的 1N NaOH) 。
檢測(cè)程序
1. 加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品(已激活) 100ul ,將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2. 洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次,向?yàn)V紙上印干。
3. 每孔中加入第一抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
6. 洗板:同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul ,置 37 ℃ 暗處反應(yīng)15 分鐘。
8. 每孔加入100ul 終止液混勻。
9. 30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在 45 0 nm 處測(cè) 吸光值。
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