【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

1.產(chǎn)品名稱：大鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞操作步驟

2.組織來源：腎組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×10^5cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡介：

大鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞分離自腎組織；腎臟是機(jī)體的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物、毒物，同時經(jīng)重吸收功能保留水份及其他有用物質(zhì)，如葡萄糖、蛋白質(zhì)、氨基酸、鈉離子、鉀離子、*等，以調(diào)節(jié)水、電解質(zhì)平衡及維護(hù)酸堿平衡。腎臟同時還有內(nèi)分泌功能，生成腎素、促紅細(xì)胞生成素、活性*3、前列腺素、激肽等，又為機(jī)體部分內(nèi)分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能，保證了機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，使新陳代謝得以正常進(jìn)行。腎小球是腎元中的用于將血液過濾生成原尿的一團(tuán)毛細(xì)血叢，被鮑氏囊所包裹，是尿液形成的重要構(gòu)造。血液經(jīng)由入球小動脈進(jìn)入腎小球。腎小球內(nèi)的微血管不像其他微血管，匯流入靜脈，而是流入出球小動脈。在腎小球內(nèi)，微血管受到高壓，而加速了超濾作用(hyperfiltration)的進(jìn)行。微血管中的血液經(jīng)由超濾作用之后，形成濾液，滲入鮑氏囊內(nèi)。腎小球與鮑氏囊合稱為腎小體，腎小球的過濾速率便稱為腎小球過濾率。腎小球內(nèi)皮細(xì)胞是一類特殊微血管類型的細(xì)胞。細(xì)胞為圓形、多角形，單層貼壁生長；細(xì)胞質(zhì)豐富，細(xì)胞核為圓形或卵圓形。腎小球內(nèi)皮細(xì)胞被覆于腎小球毛細(xì)血管壁腔側(cè)，與血流直接接觸，是腎小球?yàn)V過膜的*道屏障，可粘附細(xì)菌和白細(xì)胞，修復(fù)基底膜，并有抗凝、抗血栓的作用；所以，體外培養(yǎng)的腎小球內(nèi)皮細(xì)胞在免疫學(xué)和病理生理學(xué)領(lǐng)域中具有重要的研究價(jià)值。

本公司的大鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞采用先機(jī)械研磨過不銹鋼網(wǎng)篩分離得到腎小球、后用膠原酶消化，結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10^5cells/瓶；細(xì)胞經(jīng)CD31/vWF免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

5.培養(yǎng)基信息：

M199、FBS、內(nèi)皮細(xì)胞生長添加劑、Heparin、Ascorbic Acid、Hydrocortisone、Penicillin、Streptomycin等

冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽*儲存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
操作步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
優(yōu)勢：
1、細(xì)胞株種類齊全，包括腫瘤細(xì)胞、正常細(xì)胞、耐藥細(xì)胞株，如：人滑膜細(xì)胞，人胃癌細(xì)胞，人細(xì)胞，人腎近曲小管上皮細(xì)胞，肝癌細(xì)胞，心肌細(xì)胞，子宮內(nèi)膜細(xì)胞等
2、*，專業(yè)的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)指導(dǎo)
3、購買本公司的細(xì)胞株，免費(fèi)復(fù)蘇
4、客戶收到細(xì)胞后一天回傳細(xì)胞圖片，三天回傳細(xì)胞生長狀態(tài)圖片，五天內(nèi)有問題公司負(fù)責(zé)重發(fā)，超過五天時限至一個月內(nèi)重發(fā)細(xì)胞收半價(jià)，超過一個月重發(fā)全額收費(fèi)。
5、經(jīng)濟(jì)、實(shí)惠、可靠，完善、穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)體系，優(yōu)秀的科研隊(duì)伍，*的實(shí)驗(yàn)設(shè)備、準(zhǔn)確可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我們還可以提供Elisa試劑盒、細(xì)胞株、抗體、血清、培養(yǎng)基、常用生化試劑、耗材。

神經(jīng)肽S(NPS)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) M17306 CLIA Kit for Early B-Cell Factor 3 (EBF3) 96T Homo sapiens (Human)
神經(jīng)肽S(NPS)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) M17307 CLIA Kit for Early B-Cell Factor 3 (EBF3) 96T Mus musculus (Mouse)
神經(jīng)肽S(NPS)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) M17308 CLIA Kit for Early B-Cell Factor 3 (EBF3) 96T Rattus norvegicus (Rat)
淋巴細(xì)胞趨化因子(Lptn)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) M17309 CLIA Kit for Early B-Cell Factor 4 (EBF4) 96T Homo sapiens (Human)
淋巴細(xì)胞趨化因子(Lptn)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) M17310 CLIA Kit for Early B-Cell Factor 4 (EBF4) 96T Mus musculus (Mouse)
淋巴細(xì)胞趨化因子(Lptn)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) M17311 CLIA Kit for Early B-Cell Factor 4 (EBF4) 96T Rattus norvegicus (Rat)
顆粒酶A(GZMA)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) M17312 CLIA Kit for Fibroblast Growth Factor Receptor Substrate 3 (FRS3) 96T Homo sapiens (Human)
顆粒酶A(GZMA)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) M17313 CLIA Kit for Fibroblast Growth Factor Receptor Substrate 3 (FRS3) 96T Mus musculus (Mouse)
顆粒酶A(GZMA)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) M17314 CLIA Kit for Fibroblast Growth Factor Receptor Substrate 3 (FRS3) 96T Rattus norvegicus (Rat)
顆粒酶B(GZMB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) M17315 CLIA Kit for Interleukin 1 Zeta (IL1z) 96T Homo sapiens (Human)
顆粒酶B(GZMB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) M17316 CLIA Kit for Interleukin 1 Epsilon (IL1e) 96T Homo sapiens (Human)
Anti-IRS-4   CD38(mouse, rat)  CD38多肽（小鼠、大鼠） X57462  0.2ml
Anti-ISR   CD38(human)  CD38抗原（人） X57463  0.1ml
Anti-ISR-β    CD36  CD36（多肽） X57464  0.2ml
Anti-ITG-α/ CD49d   CD7  CD7抗原 X57465  0.1ml
Anti-ITG-β1/CD29   CD40L(CD40 Ligand/TNFSF5/CD154)  CD40L抗原 X57466  0.1ml
Anti-ITG-α5/CD49e   CD44  CD44抗原 (多肽抗原) X57467  0.2ml
Anti-ITG-β3/CD61   Argireline peptide   抗皺寡肽-1/六勝肽-3/阿基瑞林/乙酰六勝肽-3 X57468  0.1ml
Anti-JNK1/3    GHRP-2 Acetate peptide(Growth hormone-releasing peptides 2)  醋酸促生長激素釋放肽2 X57469  0.2ml
Anti-KATPC    GHRP-6 Acetate peptide(Growth hormone-releasing peptides 6)  醋酸促生長激素釋放肽6 X57470  0.2ml
Anti-Ki-67   Matrixyl Acetate  五勝肽/美容肽—M肽 X57471  0.1ml
Anti-Kiss-1    MT-II(Melanotan II Acetate)  醋酸美拉諾坦II X57472  0.1ml
Anti-Klf4    Pentapeptide-3/Leuphasyl  五勝肽 X57473  0.1ml
Anti-KLH   PT141(Bremelanotide PT-141)  雌性激素肽 X57474  0.1ml
Anti-κOR    CD45  CD45(白細(xì)胞共同抗原) X57475  1ml
Anti-K-ras   CD46/MCP(membrane cofactor protein)rat, mouse  膜輔蛋白/內(nèi)源性輔助因子活性蛋白抗原 X57476  0.1ml
Anti-Laminin alpha5   CD5  CD5 多肽抗原 X57477  0.1ml
Anti-L-Citrulline    ICAM-2/CD102(intercellular adhesion molecules-2)  細(xì)胞間粘