創傷弧菌(VV)核酸檢測試劑盒說明書PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收；剛開始時, 探針結合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴增時，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監測系統可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現了熒光信號的累積與PCR產物形成*同步。
創傷弧菌(VV)核酸檢測試劑盒說明書個標準品的OD值減去空白孔的OD值后作圖，如設置復孔，則應取其平均值計算。以標準品的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，繪出標準曲線。亦可以OD值為橫坐標，標準品的濃度為縱坐標，繪出標準曲線。
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創傷弧菌(VV)核酸檢測試劑盒說明書1、什么是定量PCR？
以參照物為標準，對PCR終產物進行分析或對PCR過程進行監測，從而達到評估樣本中靶基因的拷貝數，稱為定量PCR。定量PCR的可行性定量一般是在PCR擴增的指數期進行的。
2、定量PCR定量的理論依據是什么？
特定的待擴增基因片段起始含量越大，則指數擴增過程越短，當擴增速率趨于穩定后，則無論原來樣品中起始模板含量多少，終擴增片段的含量通常是一樣的。
理想的擴增結果：Y=X×2n 其中Y代表擴增產物量， X代表PCR反應體中的原始模板數 n為擴增次數；理論上PCR擴增效率為*，PCR產物隨著循環的進行成指數增長，但實際上：DNA的每一次復制都不*，即每一次擴增中，模板不是呈2的倍增長；實際應為：Y= X(1+E)n ，其中E 代表擴增效率：E = 參與復制的模板/總模板，通常E≤1，E在整個PCR擴增過程中不是固定不變的。通常X 在 1～105拷貝、循環次數n≤30時，E 相對穩定，原始模板以相對固定的指數形式增加，適合定量分析，這也就是所謂的指數期；隨著循環次數n的增加（>30次），E值逐漸減少，Y 呈非固定的指數形式增加，后進入平臺期。
3、熒光定量PCR定量的理論模式又是什么？
PCR是對原始待測模板核酸的一個擴增過程，任何干擾PCR指數擴增的因素都會影響擴增產物的量，使得PCR擴增終產物的數量與原始模板數量之間沒有一個固定的比例關系，通過檢測擴增終產物很難對原始模板進行準確定量。近年來研究人員通過大量的實踐，研究了相對準確的定量PCR方法，即熒光定量PCR。
PCR擴增通式： ① Tn=T0（1+E）n
② Tn=Tn-1（1+E）n 注：[0
其中E表示擴增效率，n為循環數，Tn表示在n個周期后PCR產物的數量，Tn-1表示在n-1個周期后PCR產物的數量，T0為原始模板數量。設定PCR到達指數擴增期時，產生一定的熒光(熒光依賴于某一循環擴增產物的總量，即特定的拷貝數K，為常數，大約在1010左右)高于背景為儀器所識別，此時的循環數為CP（crossing point）,也就是K= T0（1+E）CP，取對數即：
lg K=lg T0+CP*lg(1+E)
CP=- 1/lg(1+E)*lg T0 +lgk/lg(1+E)
由于對一特定的PCR而言，E與K均為常數，故上式為循環數（CP）對原始模板拷貝數的對數（lg T0）一次方程，其標準形式y=kx+b,該直線的斜率為- 1/lg(1+E)，在橫坐標上的截距為lgk/lg(1+E)，也是熒光定量PCR所謂的標準曲線。例如下圖為單管實時熒光定量RT-PCR的標準曲線：
創傷弧菌(VV)核酸檢測試劑盒說明書目前熒光定量PCR均采用外標定量
外標法定量PCR擴增效率的計算，由于標準曲線的斜率(Slope)為- 1/lg(1+E)，可知E=10-1/Slope-1 ,如從標準曲線中知道Slope=-3.337,則可推知擴增效率E=101/3。337-1=0.99,也有作者將(1+E)直接視為擴增效率E，則E=10-1/Slope，求得的E值均在1—2之間，有時也有大于2的結果，如下圖所示。另外也可直接根據系列稀釋外標在該次實時熒光PCR的結果來大略分析擴增效率的高低，例如系列10倍稀釋外標在PCR擴增時有N2=N0En2, N3=(10*N0)En3,在擴增到指數期時熒光值相同則代表此點的終末拷貝數相同，即N2=N3，En2-n3=10,取對數得到⊿ngE=1, E=101/⊿n，E=2，⊿n=3.32; E=1.8，⊿n=3.91.反之亦然。
根據PCR擴增過程中是否加入某種標記物、標記物的種類以及后檢測的信號的不同可分為四種類型：①直接定量檢測法， ②同位素標記定量，③酶標記定量檢測法，④熒光定量PCR技術
熒光定量PCR 主要原理發射波長與受體熒光染料光染料吸收供體熒光傳遞的能量而激發出另一波長的熒光，同時將供體熒光淬滅。SYBR Green I 檢測模式
SYBR Green I 是一種能與雙鏈DNA 結合發光的熒光大增強。因此， SYBR Green I的檢測出PCR體系存在的雙鏈DNA數量。SYBR Green I 的大吸收波長約為497nm，發射波長大約為520nm。PCR擴增程序一般為94℃～55℃～72℃三步法，40個循環。
SYBR Green I 的缺點：由于SYBR Green I沒有特異性，不能識別特定的雙鏈，只要是雙鏈就會結合發光，對PCR反應中的非特異性擴增或引物二聚體也會產生熒光，通常本所以在臨床上使用可能會有假陽性發生。 SYBR Green I的優點：SYBR Green I的優點是因為其缺點產生，由于它能所有的雙鏈DNA相結合，所以對不同模板不需特別定制不同的這對科研是很有利的，因此國內外在科研中使用比較普遍。
5、為什么要用熒光定量PCR技術進行定量？它與傳統的定量PCR有什么不同？
如前所述的，傳統的定量PCR有很多，主要是倍比稀釋法、內參照法、競爭法、PCR-ELISA法，但這些定量PCR技術的難點主要在于：（1）如何確定PCR正處于線性擴增范圍內（只有在此范圍內PCR產物信號才與初始模板的拷貝數成比例）。（2）一旦線性擴增范圍確定以后，如何找到一個合適的方法檢測結果。為了保證線性，研究者要擴增一系列梯度稀釋的cDNA或者對每個基因的擴增循環數作適當的調整；有的研究者加一個競爭性模板，有的做限制性的稀釋梯度分析，或者加一個PCR模擬（mimic）反應，即用相似的引物與目標產物共擴增，而擴增產物的檢測通常在跑膠以后通過染料、放射活性或者探針進行檢測。（3）大多數是終點檢測，即PCR到達平臺期后進行檢測，而PCR經過對數期擴增到達平臺期時，檢測重現性極差。同一個模板在96孔PCR儀上做96次重復實驗，所得結果有很大差異（如下圖所示），因此無法直接從終點產物量推算出起始模板量；雖然加入內標后，可部分消除終產物定量所造成的不準確性。但即使如此，傳統的定量方法也都只能算作半定量、粗略定量的方法，所以傳統定量PCR的缺點是：勞動強度大、定量不準確、重復性差。
急性子 The ace 4g

皇豆皇速Glycitqin40927-83-3HPLC≥98%，20mg/vial

補充中 Hederagenin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl (1→2)-α-L-arabinopyranoside 123350-57-2 ≥ 98% 20 mg/支

黃芪甲甙;黃芪皂苷IV黃芪甲苷84687-43-4Asagaloside IV

參皂苷Rh1;參皂甙Rh1 Ginsenoside Rh1 63223-86-9 20mg HPLC≥98% 用于含量測定

金果欖 Jin Guolan 0.1g

西紅花苷IICrocinII22720-84-0HPLC≥98%，20mg/vial

Sitostenone SITOSTENONE 1058-61-3

效價測定可溶性淀粉140602-200313常溫，避光10g

* Camptothecine 2114454 20mg HPLC≥98% 用于含量測定

薯蕷皂甙 Dioscin 19057-60-4 10MG 標準品

商陸Phytolacca esculenta van Hote 商陸皂苷甲 65497-07-6 C42H66O16 ≥98% 賣角溴煙酯;泥賣角林 - 對照譜圖(Y0000287

Myricetin楊梅素529-44-2楊梅黃酮;楊梅酮20mg/支

噻嘧啶相關物質A標準品25mg

半枝蓮Scellaria barbata Aurantiamide 橙黃胡椒酰胺乙酸酯 58115-31-4 C25H26N2O3 ≥95%

ISTRambachagarRambach瓊脂1.07500.0001MERCK默克incubationmediaISTRambachagarRambach瓊脂1.07500.0001MERCK默克  進口分裝  8-氧黃連堿  標準品別名：    英文名稱：    CAS 編號：

DRBCAgar(DichloranRoseBengalChloramphenicol)incubationmediaDRBCAgar(DichloranRoseBengalChloramphenicol)  進口分裝  N,N’-二甲基蝙蝠葛堿化物  標準品別名：    英文名稱：  N,N’-dimethyldauricine iodide  CAS 編號：

FraserBrothBaseincubationmediaFraserBrothBase  進口分裝  雙胺草酸鹽  標準品別名：  二胺  英文名稱：  4-Amino-4-Methylpentan-2-onehydrogenoxalate  CAS 編號：  625-04-7

RVS大豆肉湯用于沙門氏菌選擇性增菌500gincubationmediaRVS大豆肉湯用于沙門氏菌選擇性增菌500g  進口分裝  白花前胡丙素  標準品別名：    英文名稱：  Praeruptorin C  CAS 編號：  83382-71-2

人輪狀病毒抗原elisa試劑盒  進口分裝  黃芪總皂苷（標準品）  Astragaloside  CAS號：  17429-69-5  質量規格：  UV≥98%，標準品

人淋巴細胞抗原6復合物基因座Aelisa試劑盒  進口分裝  *,辣椒素(天然提取)  Capsaicin  CAS號：  404-86-4  質量規格：  辣椒總堿>98%,辣椒單堿>55%

人類白細胞抗原Eelisa試劑盒  進口分裝  綠原酸  Chlorogenic acid  CAS號：  327-97-9  質量規格：

創傷弧菌(VV)核酸檢測試劑盒說明書人*受體1(SSTR1)酶聯免疫吸附測定試劑盒  進口分裝   直接紅81  英文名稱：  Direct red 81  CAS號：  259636  分子式：  675.6  分子量：   C29H19N5Na2O8S2

人生長因子受體結合蛋白10(Grb10)酶聯免疫吸附測定試劑盒  進口分裝   天狼猩紅  英文名稱：  Sirius red  CAS號：  259604  分子式：  1373.07  分子量：   C45H26N10Na6O21S6

人生長因子受體結合蛋白14(Grb14)酶聯免疫吸附測定試劑盒  進口分裝   活性艷藍KN-R  英文名稱：  Reactive brilliant blue KN-R  CAS號：  2580-78-1  分子式：  626.54  分子量：   C22H16N2Na2O11S3

人生長因子受體結合蛋白2(Grb2)酶聯免疫吸附測定試劑盒  進口分裝   媒介2B  英文名稱：  Media black 2B  CAS號：  25747-08-4  分子式：  439.4  分子量：   C20H13N3O7S