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動(dòng)物種屬鑒定 PCR Mix 4100 次原理

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

動(dòng)物種屬鑒定 PCR Mix 4100 次原理運(yùn)輸及保存低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細(xì)介紹

動(dòng)物種屬鑒定 PCR Mix 4100 次原理合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長(zhǎng)度成反比。 RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對(duì)富含二級(jí)結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
動(dòng)物種屬鑒定 PCR Mix 4100 次原理按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對(duì)照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標(biāo)記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測(cè)。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機(jī)引物，將出現(xiàn)多個(gè)小片段）。

產(chǎn)品及特點(diǎn):

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長(zhǎng) cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長(zhǎng)可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。

〖CAS號(hào)〗：596-27-0
C22H18O4=346.38
〖級(jí)別〗：IND
pH變色域：8.2(無色)～9.8(紅色)
紅外光譜鑒定：和對(duì)照品匹配
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：白色或黃色結(jié)晶性粉末。易溶于乙醇、乙迷和冰乙酸，溶于稀堿溶液呈紫色，微溶于水，不溶于苯?！既埸c(diǎn)〗223℃。zui大吸收波長(zhǎng) 566(381)nm
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)酸堿指示劑
〖保存〗：RT
鄰甲*絡(luò)合劑
〖英文名稱〗：o-Cresolphthalein complexon；Me-talphthalein I；o-Cresolphthalexon；Phthalein purple；Phthalein complexone；o-Cresolphthalein di(methylaminodiacetic acid)
〖其他名稱〗：N,N'-[(3-氧代-1(3H)-異苯并呋喃基亞基]雙[(6-羥基-5-甲基-3,1-亞苯基)亞甲基]雙[N-(羧基甲基)*]；酞紫；金屬酞；*紫；2-甲*絡(luò)合劑；3',3''-雙[[雙(羧甲基)氨基]甲基]-5', 5''-二甲基*
〖CAS號(hào)〗：2411-89-4
C32H32N2O12=636.61
〖級(jí)別〗：AR
〖含量〗（分光光度法）：≥80.0%
靈敏度：合格
〖水溶解實(shí)驗(yàn)劑〗：合格

細(xì)胞計(jì)數(shù)液 (Vi-CELL 儀 )   β －瓊脂糖酶
Protein A+G 瓊脂糖   β- 瓊脂糖酶Ⅰ
即用型 GFP 標(biāo)簽蛋白裂解液   β- 瓊脂糖酶Ⅰ
動(dòng)態(tài)顯色法內(nèi)毒素定量試劑盒   β- 基乙醇
動(dòng)態(tài)濁度法內(nèi)毒素定量試劑盒   β- 基乙醇，蛋白
WGA 糖蛋白分離試劑盒   β- 基乙醇，電泳
大提柱式酵母 DNAout   β-Actin 小鼠單抗
小牛胸腺 DNA 溶液   β-Actin 小鼠單抗
DNA 探針變性液   β-D- 阿糖胞苷
MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶 (H-)   β-Tubulin 小鼠單抗
耐熱型 MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶 (H-)   β-Tubulin 小鼠單抗
96 孔板 PCR 片段純化回收試劑盒 ( 真空法 )   γ
PCR Mix 染料   γ- 環(huán)狀糊精
DAB 法*雜交試劑盒   γ- 球蛋白 ( 牛血 )
TMB 法*雜交試劑盒   λ 噬菌體 DNAout
ATP 溶液，2.5mM   φ
UTP 溶液，2.5mM   φ29 DNA 聚合酶
GTP 溶液，2