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LAMP 擴增陽性對照50 次原理

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更新時間:2017-01-19 15:25:21瀏覽次數:445次

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產品簡介

LAMP 擴增陽性對照50 次原理運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細介紹

LAMP 擴增陽性對照50 次原理合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
LAMP 擴增陽性對照50 次原理按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現多個小片段)。

產品介紹:

產品及特點:

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶,內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。

〖CAS號〗:604-44-4
C10H7C1O=178.61
〖級別〗:試劑級
純度:≥97.0%
〖熔點〗:120~121℃
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:白色針狀結晶或類白色至灰色、淡紅色、淺棕色粉末。對光和空氣敏感。能升華。易溶于乙醇、乙迷、氯方和苯。〖熔點〗120~121℃。
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)電泳測試,適用于印跡膜上過氧化物酶檢測。過氧化物酶染色:用在等電聚焦和硝酸纖維素膜免疫印跡檢測專一性抗原中;快速多色Western blot印跡中。
〖保存〗:2~8℃,避光
2-萘酚
〖英文名稱〗:2-Naphthol;β-Hydroxynaphthalene;2-Hydroxynaphthalene;Isonaphthol;2-Naphthalenol;C.I.37500
〖其他名稱〗:二萘酚;乙萘酚;異萘酚;β-萘酚;β-羥基萘;2-羥基萘
〖CAS號〗:135-19-3
C10H8O=144.17
〖級別〗:AR
〖含量〗:≥99.0%
〖熔點〗:121~123℃

Quin-2AM    小鼠 NK 細胞分離液 1.076
Rhod-2,三鈉鹽    小鼠單核細胞分離液 1.090
Rhodamine123    小鼠淋巴細胞分離液 1.092
SPQ(6- 甲氧基 -N-(3- 磺丙基 ) 喹啉 )    小鼠白細胞分離液 1.093
TMRE    小鼠中性粒細胞分離液 1.100
TSQ(6- 甲氧基 -(8-p- 甲苯磺酰胺 ) 喹啉    小鼠粒細胞分離液 1.128
Tubulin-Tracker Red( 微管紅色熒光探針 )    人血液和骨髓造血干細胞分離液 1.068-1
Zinquin 乙酯    大鼠單核細胞分離液 1.082
1400W(iNOS 抑制劑 )    分子雜交爐
5-Fluorouracil(5- 脲嘧啶 )    紫外交聯儀
Ac-DEVD-FMK(Caspase3Inhibitor)    雜交管 (35×100mm)
Ac-IETD-FMK(Caspase8Inhibitor)    雜交管 (35×200mm)
Ac-LEHD-FMK(Caspase9Inhibitor)    雜交管 (35×300mm)
Actinomycin D( 基因轉錄抑制劑 )    液體樣品 DNAout
AG490(JAK 抑制劑 )    綠如蘭核酸染料 ( 可見光型 )
AICAR(AMPK 激活劑 )    Rosetta(DE3) 感受態細胞
    SMD1168 酵母菌種


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