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dTTP 溶液，100mM0.5mL實驗方法

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更新時間：2017-01-19 14:09:06瀏覽次數(shù)：259次

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產(chǎn)品簡介

dTTP 溶液，100mM0.5mL實驗方法運輸及保存低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細介紹

dTTP 溶液，100mM0.5mL實驗方法產(chǎn)品及特點:

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構(gòu)建、RT-PCR、探針標記等。

dTTP 溶液，100mM0.5mL實驗方法合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機引物，將出現(xiàn)多個小片段）。

C9H6O2=146.14
〖級別〗：BR
〖含量〗：≥97%
〖熔點〗：117～124℃
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：黃色粉末或結(jié)晶。
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗
〖保存〗：RT
4-芐基氨基-7-硝基苯并氧雜惡二唑
〖英文名稱〗：BBD；7-Benzylamino-4-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazole；4-Benzylamino-7-nitrobenzofurazan

番紅 O   非蛋白型 Western 封堵液
*鈉   腦心浸液
茚三酮   哺乳動物雙雜交試劑盒
甲基紅   柱式石蠟包埋組織 DNAout2.0（二代測序）
鹽酸胍   柱式微生物基因組 DNAout
*   單細胞全轉(zhuǎn)錄組擴增試劑盒
氫   酚 - 混合液 (RNA 提取 )
苔素   酚 - 混合液 (DNA 提取 )
β- 硫代*酸   超敏化學(xué)發(fā)光（HRP）檢測試劑盒 2.0
D- 核糖   超敏化學(xué)發(fā)光（HRP）檢測試劑盒 2.0
D- *   B-5 固定液
菌素 D   Verhoeff 固定液
乙酰水楊酸