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天凈沙非同位素探針雜交試劑盒5次實(shí)驗(yàn)步驟

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天凈沙非同位素探針雜交試劑盒5次實(shí)驗(yàn)步驟運(yùn)輸及保存：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細(xì)介紹

天凈沙非同位素探針雜交試劑盒5次實(shí)驗(yàn)步驟產(chǎn)品介紹：

天凈沙非同位素探針雜交試劑盒5次實(shí)驗(yàn)步驟使用方法:
一、交換反應(yīng) 1. 實(shí)驗(yàn)前需自備的試劑：7 M 醋酸銨、*乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液：成分加入的體積自備的 5’磷酸化 DNA 片段 14 μL(≤5 pmoles 的 5′末端) 5×交換反應(yīng)緩沖液 5 μL [γ -32P] ATP 5 μL T4 多聚核苷酸激酶（10 U/μL） 1 μL 滅菌的超純水補(bǔ)足到 25 μL 注：5 pmoles 的 5’末端約等于 0.17 μg 的長(zhǎng) 100 bp 的雙鏈 DNA。
3. 37℃反應(yīng) 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5～10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4（pH 4.5）。如使用 CH3COONa 做乙醇沉淀時(shí)使其終濃度達(dá) 300 mM。
6. 加入 87.5 μL（2.5 倍）的冷無(wú)水乙醇，-20℃放置 30～60 分鐘。
7. 離心回收沉淀，用 70%的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。 8. 用適當(dāng) Buffer 溶解沉淀。注：通過(guò)第 5～8 步操作幾乎可以除去大部分未反應(yīng)的[γ-32P] ATP，如要 *將其除去時(shí)，乙醇沉淀后用凝膠過(guò)濾等方法精制即可。如需用*抽提除去蛋白質(zhì)時(shí)，請(qǐng)?jiān)诘?br />8 步之后進(jìn)行。
磷酸化反應(yīng)標(biāo)記：
A. 去磷酸化反應(yīng)
1. 實(shí)驗(yàn)前需自備的試劑：TE 飽和酚/、3 M NaCl 、*乙醇、70% 乙醇、牛小腸堿性磷酸酶（CIAP）等 2. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液：成分加入的體積自備的 DNA 片段 133 μL(≤10 μg) 1 M Tris-HCl，pH 8.0 15 μL 牛小腸堿性磷酸酶（CIAP，10~20 U/μL）
2 μL 滅菌的超純水補(bǔ)足到 150 μL
3. 50℃反應(yīng) 30 分鐘。
4. 加入 150 μL 的 TE 飽和酚//（25：24：1），充分混勻。
5. 離心，取上層（水層）移到另一個(gè)微量離心管中。
6. 重復(fù)操作 4～5。
7. 加入 7.5 μL 的 3 M NaCl（zui終濃度 150 mM）。
8. 加入 375 μL（2.5 倍量）的冷無(wú)水乙醇，-20℃放置 30～60 分鐘。
9. 離心回收沉淀，用 1 mL 70%的冷乙醇清洗后，沉淀真空干燥。

10. 使用 20 μL 的 TE Buffer 溶解沉淀。
磷酸化反應(yīng)（前反應(yīng)）：
1. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液：

2. 37℃反應(yīng) 30 分鐘。
3. 下面的操作與交換反應(yīng)的第 4-8 步操作相同。
合成 DNA 寡核苷酸的標(biāo)記：
當(dāng)摻入水平很低的時(shí)候，需要使用本步驟，即通過(guò)體積排阻色譜或過(guò)濾試劑盒除去未反應(yīng)的標(biāo)記。Sephadex G-50 層析柱（需另購(gòu)）對(duì)于去除未摻入的 dNTPs 效果很好，它還能大幅減少小于 20 個(gè)堿基的 DNA 寡核苷酸和小于 20 bp 的雙鏈 DNA 的量。使用之前需要在 70℃加熱 5～10 分鐘以使 T4 多聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 層析柱可以用來(lái)純化長(zhǎng)度不小于 10 個(gè) 堿基的寡核苷酸。

接頭 DNA(pSma I)   5nmol   交聯(lián)瓊脂糖凝膠 6B
EcoR I-Not I-BamH I 接頭   1nmol   溴甲酚綠
Oligo 快速?gòu)?fù)性液，10×   1mL   羅丹明 123
裂殖酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒   20 次   玫瑰紅鈉鹽
裂殖酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒 ( 含轉(zhuǎn)化液 )   20 次   亮綠
酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒   20 次   1,4- 雙丙烯酰
酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒 ( 含轉(zhuǎn)化液 )   20 次   6- 羥基多巴胺
酵母電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒   20 次   麥芽糖
高效 E.coli 感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒   20 次   L- *
高效農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒   20 次   L- 苯*
DH5α 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞   0.1mL×10   3,3’,5,5’- 四甲基聯(lián)苯胺二鹽酸

3-硝基苯，英文名或英文縮寫：3-Nitroaniline，級(jí)別：高純，75%，規(guī)格：25毫克
PEPSTATIN*抑制劑超純級(jí)25MG26305-03-3COLD
二甲基二氨基呫噸基氯，英文名或英文縮寫：Acridine red，級(jí)別：ACS，規(guī)格：30毫升
TAPS,SODIUMSALTTAPS Na生物技術(shù)級(jí)25G91000-53-2RT
1-苯基-3-甲基-4-苯甲酰基-5-吡唑啉酮，英文名或英文縮寫：PMBP，級(jí)別：BS，規(guī)格：1克
PEPTONE蛋白胨細(xì)菌學(xué)級(jí)100GRT
十二鉬嶙酸，英文名或英文縮寫：Phosphomolybdic acid hydrate，級(jí)別：GR，98%，規(guī)格：25克
ALKALINEPHOSPHATASEPH9.54L#N/A
石蕊指示劑，英文名或英文縮寫：Litmus，級(jí)別：AR，規(guī)格：100毫克
M9CAMEDIUMBROTH,POWDERM9CA 培養(yǎng)基肉湯生物技術(shù)級(jí)100GRT
還原茚三酮二水合物，英文名或英文縮寫：Hydrindantin dihydrate，級(jí)別：生物技術(shù)級(jí)，5/240mg，規(guī)格：100毫克
2XYTMEDIUMBROTH2XYT 培養(yǎng)基肉湯生物技術(shù)級(jí)500GRT
9005-64-5