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上海邦景實業有限公司
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TdT 加尾法 DNA *標記試劑盒5次實驗方法運輸及保存：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。
TdT 加尾法 DNA *標記試劑盒5次實驗方法使用方法:
一、交換反應 1. 實驗前需自備的試劑：7 M 醋酸銨、*乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應液： 成分 加入的體積 自備的 5’磷酸化 DNA 片段 14 μL(≤5 pmoles 的 5′末端) 5×交換反應緩沖液 5 μL [γ -32P] ATP 5 μL T4 多聚核苷酸激酶（10 U/μL） 1 μL 滅菌的超純水 補足到 25 μL 注：5 pmoles 的 5’末端約等于 0.17 μg 的長 100 bp 的雙鏈 DNA。
3. 37℃反應 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5～10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4（pH 4.5）。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀時使其終濃度達 300 mM。
6. 加入 87.5 μL（2.5 倍）的冷無水乙醇，-20℃放置 30～60 分鐘。
7. 離心回收沉淀，用 70%的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。 8. 用適當 Buffer 溶解沉淀。 注：通過第 5～8 步操作幾乎可以除去大部分未反應的[γ-32P] ATP，如要 *將其除去時，乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白質時，請在第
8 步之后進行。
TdT 加尾法 DNA *標記試劑盒5次實驗方法產品介紹：
磷酸化反應標記：
A. 去磷酸化反應
1. 實驗前需自備的試劑：TE 飽和酚/、3 M NaCl 、*乙醇、70% 乙醇、牛小腸堿性磷酸酶（CIAP）等 2. 在微量離心管中制備下列反應液： 成分 加入的體積 自備的 DNA 片段 133 μL(≤10 μg) 1 M Tris-HCl，pH 8.0 15 μL 牛小腸堿性磷酸酶 （CIAP，10~20 U/μL）
2 μL 滅菌的超純水 補足到 150 μL
3. 50℃反應 30 分鐘。
4. 加入 150 μL 的 TE 飽和酚//（25：24：1），充分混勻。
5. 離心，取上層（水層）移到另一個微量離心管中。
6. 重復操作 4～5。
7. 加入 7.5 μL 的 3 M NaCl（zui終濃度 150 mM）。
8. 加入 375 μL（2.5 倍量）的冷無水乙醇，-20℃放置 30～60 分鐘。
9. 離心回收沉淀，用 1 mL 70%的冷乙醇清洗后，沉淀真空干燥。 10. 使用 20 μL 的 TE Buffer 溶解沉淀。
磷酸化反應（前反應）：
1. 在微量離心管中制備下列反應液：
2. 37℃反應 30 分鐘。
3. 下面的操作與交換反應的第 4-8 步操作相同。
合成 DNA 寡核苷酸的標記：
當摻入水平很低的時候，需要使用本步驟，即通過體積排阻色譜或過濾試 劑盒除去未反應的標記。Sephadex G-50 層析柱（需另購）對于去除未摻入 的 dNTPs 效果很好，它還能大幅減少小于 20 個堿基的 DNA 寡核苷酸和小于 20 bp 的雙鏈 DNA 的量。使用之前需要在 70℃加熱 5～10 分鐘以使 T4 多 聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 層析柱可以用來純化長度不小于 10 個 堿基的寡核苷酸。
〖其他名稱〗：無色孔雀石綠；隱性孔雀石綠；二(對二甲氨基苯基)苯基甲烷；隱色孔雀綠；P,P'-亞芐雙-N,N-二甲苯胺；還原孔雀綠；P,P'-亞芐雙-N,N'二甲胺苯
〖CAS號〗：129-73-7
C23H26N2=330.47
〖級別〗：Analytical standard
〖含量〗：≥98.0%（HPLC）
〖熔點〗：100～102℃
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：白色至棕褐色或淡藍色或淡綠色粉末。是孔雀石綠的酸性還原物,含有一定量的〖鋅〗鹽。對光敏感。空氣中易氧化。易溶于苯、甲苯、乙迷,溶于乙醇,微溶于石油英,不溶于水。〖熔點〗102℃(94℃)。沸點(分解)。zui大吸收波長623nm
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)酸堿指示劑。顯色劑。檢定鈰、銥、〖鐵〗。金的光度測定。痕量錳的催化光度測定。使用前，在P2O5干燥器中干燥48小時以上，以除去水分。使用時應注意防護，避免吸入或與皮膚接觸。產品開封后，應盡快恢復密封狀態，在規定條件下〖保存〗
〖保存〗：RT，避光
石炭酸復紅
〖英文名稱〗：Carbol fuchsin
〖其他名稱〗：石炭酸品紅；卡寶品紅；酚品紅；哥瑞母氏石碳酸品紅；石碳酸品紅；*品紅
〖CAS號〗：4197-24-4
〖級別〗：IND
紅外光譜〖鑒別〗：合格
紫外光譜：合格
λmax（in water)：約542 nm
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：粉末為暗綠色至褐色粉末，液體為暗綠色至褐色液體，是*與堿性品紅的混合物，對光和空氣敏感。zui大吸收波長547nm。粉末應用時溶于乙醇后，再加蒸餾水稀釋
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