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TdT 加尾法 DNA 標(biāo)記試劑盒5次實(shí)驗(yàn)方法

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TdT 加尾法 DNA 標(biāo)記試劑盒5次實(shí)驗(yàn)方法運(yùn)輸及保存：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細(xì)介紹

TdT 加尾法 DNA 標(biāo)記試劑盒5次實(shí)驗(yàn)方法使用方法:
一、交換反應(yīng) 1. 實(shí)驗(yàn)前需自備的試劑：7 M 醋酸銨、*乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液：成分加入的體積自備的 5’磷酸化 DNA 片段 14 μL(≤5 pmoles 的 5′末端) 5×交換反應(yīng)緩沖液 5 μL [γ -32P] ATP 5 μL T4 多聚核苷酸激酶（10 U/μL） 1 μL 滅菌的超純水補(bǔ)足到 25 μL 注：5 pmoles 的 5’末端約等于 0.17 μg 的長(zhǎng) 100 bp 的雙鏈 DNA。
3. 37℃反應(yīng) 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5～10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4（pH 4.5）。如使用 CH3COONa 做乙醇沉淀時(shí)使其終濃度達(dá) 300 mM。
6. 加入 87.5 μL（2.5 倍）的冷無(wú)水乙醇，-20℃放置 30～60 分鐘。
7. 離心回收沉淀，用 70%的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。 8. 用適當(dāng) Buffer 溶解沉淀。注：通過(guò)第 5～8 步操作幾乎可以除去大部分未反應(yīng)的[γ-32P] ATP，如要 *將其除去時(shí)，乙醇沉淀后用凝膠過(guò)濾等方法精制即可。如需用*抽提除去蛋白質(zhì)時(shí)，請(qǐng)?jiān)诘?br />8 步之后進(jìn)行。
TdT 加尾法 DNA 標(biāo)記試劑盒5次實(shí)驗(yàn)方法產(chǎn)品介紹：

磷酸化反應(yīng)標(biāo)記：
A. 去磷酸化反應(yīng)
1. 實(shí)驗(yàn)前需自備的試劑：TE 飽和酚/、3 M NaCl 、*乙醇、70% 乙醇、牛小腸堿性磷酸酶（CIAP）等 2. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液：成分加入的體積自備的 DNA 片段 133 μL(≤10 μg) 1 M Tris-HCl，pH 8.0 15 μL 牛小腸堿性磷酸酶（CIAP，10~20 U/μL）
2 μL 滅菌的超純水補(bǔ)足到 150 μL
3. 50℃反應(yīng) 30 分鐘。
4. 加入 150 μL 的 TE 飽和酚//（25：24：1），充分混勻。
5. 離心，取上層（水層）移到另一個(gè)微量離心管中。
6. 重復(fù)操作 4～5。
7. 加入 7.5 μL 的 3 M NaCl（zui終濃度 150 mM）。
8. 加入 375 μL（2.5 倍量）的冷無(wú)水乙醇，-20℃放置 30～60 分鐘。
9. 離心回收沉淀，用 1 mL 70%的冷乙醇清洗后，沉淀真空干燥。 10. 使用 20 μL 的 TE Buffer 溶解沉淀。
磷酸化反應(yīng)（前反應(yīng)）：
1. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液：

2. 37℃反應(yīng) 30 分鐘。
3. 下面的操作與交換反應(yīng)的第 4-8 步操作相同。
合成 DNA 寡核苷酸的標(biāo)記：
當(dāng)摻入水平很低的時(shí)候，需要使用本步驟，即通過(guò)體積排阻色譜或過(guò)濾試劑盒除去未反應(yīng)的標(biāo)記。Sephadex G-50 層析柱（需另購(gòu)）對(duì)于去除未摻入的 dNTPs 效果很好，它還能大幅減少小于 20 個(gè)堿基的 DNA 寡核苷酸和小于 20 bp 的雙鏈 DNA 的量。使用之前需要在 70℃加熱 5～10 分鐘以使 T4 多聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 層析柱可以用來(lái)純化長(zhǎng)度不小于 10 個(gè) 堿基的寡核苷酸。

沉降菌測(cè)試培養(yǎng)基
亞碲酸鹽卵黃增菌液 5mL/支×10(g) incubation media 亞碲酸鹽卵黃增菌液 5mL/支×10(g)
3% NaC1*脫羧酶發(fā)酵管 3% NaC1*脫羧酶發(fā)酵管 20支 BR
磷酸鹽葡萄糖胨水培養(yǎng)基250用于甲基紅試驗(yàn)incubationmedia磷酸鹽葡萄糖胨水培養(yǎng)基250用于甲基紅試驗(yàn)
TTC
沙氏瓊脂培養(yǎng)基(SDA)250g用途：用于醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))沉降菌的測(cè)試(GB/T
凍干血漿 0.5mL/支×10(g) incubation media 凍干血漿 0.5mL/支×10(g)
3.5% NaC1*脫羧酶發(fā)酵管 3.5% NaC1*脫羧酶發(fā)酵管 20支 BR
甲基紅指示劑盒基紅試驗(yàn)配套試劑incubationmedia甲基紅指示劑盒基紅試驗(yàn)配套試劑
波爾頓選擇性增菌肉湯添加劑 2ml*5 每支添加于225mlHB0273中
SabouraudsAgar
DNA酶瓊脂 100(g) incubation media DNA酶瓊脂 100(g)
*脫羧酶對(duì)照發(fā)酵管 *脫羧酶對(duì)照發(fā)酵管 20支 BR
胰蛋白胨水培養(yǎng)基250用于靛基質(zhì)試驗(yàn)incubationmedia胰蛋白胨水培養(yǎng)基250用于靛基質(zhì)試驗(yàn)
BoltonSelectiveEnrichmentbrothadditive
大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基(TSA)于醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))沉降菌的測(cè)試(GB/T-2010)
7.5%鈉肉湯 250(g) incubation media 7.5%鈉肉湯 250(g)
3% NaC1*脫羧酶發(fā)酵管 3% NaC1*脫羧酶發(fā)酵管 20支 BR
Kovacs氏靛基質(zhì)試劑盒2用于吲哚(靛基質(zhì))試驗(yàn)配套試劑incubationmediaKovacs氏靛基質(zhì)試劑盒2用于吲哚(靛基質(zhì))試驗(yàn)配套試劑
改良CCD瓊脂添加劑 1ml*5 用于添加100ml HB0274-1中
TryptoseSoyaAgar
7.5%鈉肉湯 1000(g) incubation media 7.5%鈉肉湯 1000(g)
3.5% NaC1*脫羧酶發(fā)酵管 3.5% NaC1*脫羧酶發(fā)酵管 20支 BR
ASS瓊脂250用于磺胺類靈敏度試驗(yàn)(WHO方法)incubationmediaASS瓊脂250用于磺胺類靈敏度試驗(yàn)(WHO方法)
CCDAgarAdditive

〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)生物染色劑，用于結(jié)核桿菌染色和其他抗酸性桿菌染色。
〖保存〗：RT，避光
亮藍(lán)
〖英文名稱〗：Erioglaucine disodium salt；Acid Blue 9；Alphazurine FG；C.I. Food Blue 2；C.I. 42090
〖其他名稱〗：酸性藍(lán)9；罌紅二鈉鹽；雙[4-（N-乙基-N-3-磺酸苯甲基）氨基苯基]-2-磺酸甲苯基二鈉鹽；食品藍(lán)1；羊毛罌紅A；C.I.食品藍(lán)2(42090)；藍(lán)色1號(hào)；亮藍(lán)1
〖CAS號(hào)〗：3844-45-9
C37H34Na2N2O9S3=792.85
〖級(jí)別〗：BR
〖含量〗：≥85.0%
λmax：625～630nm
=358.37