Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；HCT116-Cas9-567復(fù)蘇來(lái)源可靠（源于A(yíng)TCC、ECACC、DSMZ、JCRB等），活力>95%，貼壁性好。我們從試劑、包被器皿、凍存原代細(xì)胞、新鮮原代細(xì)胞、原代細(xì)胞的分子學(xué)實(shí)驗(yàn)等提供全程服務(wù)。我司擁有專(zhuān)業(yè)的實(shí)驗(yàn)室，可無(wú)菌操作并提供相關(guān)科研項(xiàng)目解決方案以及實(shí)驗(yàn)服務(wù)。
細(xì)胞名稱(chēng) Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；HCT116-Cas9-567復(fù)蘇
形態(tài)特性 上皮樣；多角
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 該細(xì)胞是采用慢病毒感染的方式使HCT116細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)Cas9-Flag-Puromycin，經(jīng)2ug/ml嘌呤霉素篩選得到的單克隆，經(jīng)Western Blotting驗(yàn)證該克隆可以表達(dá)Cas9蛋白，可直接用Crispr技術(shù)編輯基因組DNA。
培養(yǎng)條件 IMDM: Iscove's Modiefied Dulbecco's Medium 10%FBS；2ug/ml Puromycin
傳代方法 1:3傳代；3~4天1次。
傳代情況 C3
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法（-）
STR Amelogenin：x,x；CSF1PO：7,10；D12S391：17,22；D13S317：10,12；D16S539：11,13；D18S51：17,17；D19S433：12,13；D21S11：29,30；D2S1338：16,16；D3S1358：12,19；D5S818：10,11；D6S1043：13,13；D7S820：11,12；D8S1179：12,14；FGA：18,23；Penta E：13,14；TH01：8,9；TPOX：8,8；vWA：17,22；
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類(lèi)
| 產(chǎn)品名稱(chēng) | 生長(zhǎng)特性 | 發(fā)貨地 | 貨期 |
| 貼壁生長(zhǎng) | 上海 | 3－5天 |
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量*，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量*，使*的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀(guān)察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去*，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止*作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀(guān)察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。
AAnti-Profilin 2/FITC 熒光素標(biāo)記前纖維蛋白2抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-PROK1/EG-VEGF/FITC 熒光素標(biāo)記內(nèi)分泌腺衍生血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-Proteasome 20S LMP2 /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠低分子質(zhì)量蛋白2抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-RASGRF1/FITC 熒光素標(biāo)記Ras特異*核苷酸釋放因子1抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-Phospho-RasGRF1 (Ser916)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化Ras特異*核苷酸釋放因子1抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-Rb/P105 RB/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤抑癌蛋白抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-RCC1/FITC 熒光素標(biāo)記染色體濃縮調(diào)控蛋白1抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-Rbms3 protein/FITC 熒光素標(biāo)記Rbms3 protein抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-Phospho-RCC1 (Ser11) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化染色體濃縮調(diào)控蛋白1抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-Reprimo/Rprm/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的糖基化蛋白抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-Resistin/FITC 熒光素標(biāo)記抵抗素抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2ml
Anti-RelB /FITC 熒光素標(biāo)記核轉(zhuǎn)錄因子NFKB-RelB蛋白抗體IgG Multi-class antibodies 規(guī)格： 0.2mlRBMX2 英文名稱(chēng)： RNA結(jié)合蛋白X-連鎖蛋白2抗體 ?0.1ml
Rb2 p130 英文名稱(chēng)： 視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤相關(guān)蛋白p130抗體 ?0.1ml
Phospho-A Raf (Tyr301 + Tyr302) 英文名稱(chēng)： 磷酸化A-Raf抗體 ?0.1ml
RNF10 英文名稱(chēng)： 環(huán)指蛋白10抗體 ?0.2ml
RanBP2 英文名稱(chēng)： RAN結(jié)合蛋白2/核孔蛋白抗體 ?0.2ml
RNF11 英文名稱(chēng)： 環(huán)指蛋白11抗體 ?0.2ml
RPLP2 英文名稱(chēng)： 酸核糖體磷蛋白P2抗體 ?0.2ml
RCAS1 英文名稱(chēng)： 腫瘤相關(guān)表面抗原RCAS1抗體 ?0.2ml
Ryanodine Receptor 英文名稱(chēng)： 心肌蘭尼堿受體抗體（腦肌蘭尼堿受體） ?0.2ml
RASSF5 英文名稱(chēng)： RASSF5抗體 ?0.2ml
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