ELISA試劑盒 文獻(xiàn)報(bào)道81 %的ADSCs克隆至少向一個(gè)譜系分化, 52 %的ADSCs克隆向2個(gè)或更多的譜系分化，與ADSCs是一種多能成體干細(xì)胞而不是混合的專能祖細(xì)胞的假說相符合[5]。通過體外培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)[6]，ADSCs呈梭形生長，胞漿和核仁豐富，呈平行排列或漩渦樣生長。呈現(xiàn)穩(wěn)定一致的倍增周期，均約55~60 h。ADSCs體外培養(yǎng)時(shí)，分裂增殖能力強(qiáng)，無明顯的生長滯緩期，第3天進(jìn)入對數(shù)生*，第6天達(dá)到生長峰值，第7天后進(jìn)入平臺期。傳15代后，細(xì)胞的生長增殖能力無明顯下降。
βgal細(xì)胞染色是研究細(xì)胞衰老中一種常用的實(shí)驗(yàn)手段，pH6.0時(shí)衰老的細(xì)胞會(huì)呈現(xiàn)βgal陽性染色。以此技術(shù)檢測ADSCs在傳代過程中的衰老程度，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，第1代ADSCs均染色陰性，第7~l5代ADSCs中才出現(xiàn)陽性染色細(xì)胞，隨代次增加陽性染色細(xì)胞數(shù)雖有所增加，但第l5代時(shí)也僅約5 %。這提示ADSCs不但具有較強(qiáng)的再生能力，而且兼有低衰老性特征，有望成為組織工程中理想的干細(xì)胞來源。
ELISA試劑盒采用流式細(xì)胞儀分析ADSCs的表面標(biāo)志，發(fā)現(xiàn)CD9、CD10、CD13、CD29、CD44、CD71、CD90、CD105（SH2）、SH3、CD166均為陽性，其中CD105、CD166為間充質(zhì)干細(xì)胞相對特異性標(biāo)志，而CD31、CD34、CD45等造血細(xì)胞標(biāo)志物和人類主要組織相容抗原Ⅱ型HLADR均為陰性，上述細(xì)胞表型與骨髓來源的間充質(zhì)干細(xì)胞基本相同[7，8]。
二、ADSCs與骨髓干細(xì)胞的異同點(diǎn)
De Ugarte等[9]以及李公賓等[10]通過分別獲取骨髓與脂肪組織，并對ADSCs和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrowderived mesenchymal stem cells, BDMSCs ）進(jìn)行了比較，初步證明二者均源自中胚層,無論在細(xì)胞生長增殖方式、多向分化的潛能、外源基因的導(dǎo)入還是免疫原性等都無顯著差異，但是兩者仍有一定區(qū)別。其差異主要表現(xiàn)在：⑴來源及獲取方法:BDMSCs需要骨髓穿刺，經(jīng)密度梯度離心方法獲得，量少，約1×l05個(gè)骨髓間質(zhì)細(xì)胞方能獲取1個(gè)間充質(zhì)干細(xì)胞，而且痛苦大;ADSCs來自脂肪組織抽吸物，簡單消化、離心等即可獲取，量大，300 ml脂肪抽吸物中一般可得到2×108～6×108 個(gè)細(xì)胞，痛苦小。⑵細(xì)胞表面抗原不同：ADSCs為CD49+,CD106;BDMSCs為CD49,CD106+ 。⑶體外培養(yǎng)方式不同：BDMSCs體外培養(yǎng)時(shí)，對血清質(zhì)量與來源要求較高，但ADSCs細(xì)胞體外增殖和分化時(shí)無特別要求。
三、ADSCs多向分化能力誘導(dǎo)及檢測指標(biāo)
ELISA試劑盒1.定向分化為脂肪細(xì)胞： 以Eagle細(xì)胞培養(yǎng)基（DMEM），加入誘導(dǎo)劑胰島素、1甲基3異丙基黃嘌呤、 或*、*或噻唑烷二酮（一種能活化配體的過氧化物酶增強(qiáng)劑）、泛酸、*和三碘甲腺原氨酸進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)。7～10 d后，經(jīng)油紅O或尼羅河紅染色陽性，反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RTPCR）技術(shù)檢測到脂蛋白酶的表達(dá)，并確定其分泌脂蛋白瘦素[11]。
2.定向分化為軟骨細(xì)胞： 三維環(huán)境的培養(yǎng)有利于朝軟骨方向分化并且維持其表型。其誘導(dǎo)可采用微團(tuán)培養(yǎng)的方式[12]，同時(shí)培養(yǎng)基中加入轉(zhuǎn)化生長因子（TGFβ1）、胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白等，6 d后加入抗壞血酸二磷酸鹽，促使細(xì)胞向軟骨細(xì)胞的分化。1周后光鏡下可見到白色的軟骨結(jié)節(jié)，采用阿藍(lán)染色可觀察到軟骨組織所*的硫酸蛋白聚糖表達(dá)，免疫組織化學(xué)可檢測到結(jié)節(jié)中的Ⅱ型膠原以及硫酸角質(zhì)素、*的表達(dá)，RTPCR技術(shù)可檢測到軟骨膠原的表達(dá)。魏義勇等[13]也通過實(shí)驗(yàn)證明，TGFβ1和骨形成蛋白2（BMP2）具有誘導(dǎo)脂肪干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞定向分化的作用。
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