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技術(shù)文章

細胞復蘇流程

閱讀:599發(fā)布時間:2017-6-5

細胞復蘇流程

復蘇操作步驟:
實驗前準備:
1.將水浴鍋預熱至37℃
2.用75%酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面。
3.在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶等
迅速解凍:
1.    迅速將凍存管投入到已經(jīng)預熱的水浴鍋中迅速解凍,并要不斷的搖動,使管中的液體迅速融化,時間控制在1分鐘左右
離心去除凍存液:
1.  融解好的細胞迅速放進離心機中,2000r/min 或者600g離心2min
2.  吸棄上清液。
3.  用4-5ml*培養(yǎng)基重懸細胞,吹打制成單細胞懸液,細胞濃度以5×105/ml為宜。
4.  將復蘇好的細胞懸液分裝入培養(yǎng)瓶內(nèi),將培養(yǎng)瓶放入37℃和5%CO2的培養(yǎng)箱內(nèi),8-24小時后換液繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng),換液的時間由細胞生長情況而定。


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