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本方法是通過促細胞分裂劑與細胞表面受體相互作用,在體外觸發細胞的多克隆激活。根據所使用的促細胞分裂劑的不同,應答細胞可以是T淋巴細胞、B淋巴細胞,或兩者同時,或者是單核細胞。 細胞激活可以通過細胞增殖、細胞因子分泌、表面抗原表達和/或細胞體積的增加進行檢測。例如在使用B細胞激活劑時,可以通過多克隆免疫球蛋白的分泌進行檢測。
表1 常用的促細胞分裂劑和多克隆淋巴細胞激活劑
促細胞分裂劑
所 用 濃 度
應 答 細 胞
刀豆蛋白A ConA
1- 10 μg/ml
T 淋巴細胞
植物凝集素PHA
1-5 μg/ml
T 淋巴細胞
佛波醇酯PMA
1-10 ng/ml
T 淋巴細胞
婁諾霉素+PMA
100-500 ng/ml
T 淋巴細胞
脂多糖LPS
2-25 μg/ml
鼠b細胞(T不依賴型),
單核細胞
美洲商陸PWN
試驗測定
人B細胞(T依賴型)
葡萄球菌A,SAC
1/1000-1/10000
人B細胞
試劑和設備:
細胞懸浮液;
96孔平底組織培養板;
含血清培養基(通常為 RPMI 1640,含10% 胎牛血清,100U/ml青霉素,100μg/ml鏈霉素);
促細胞分裂劑(見表1),要求純品或半純品,有市售商品;
多通道移液器和微量移液器;
帶570nm濾片的酶標儀;
超凈工作臺;
CO2孵箱;
冷凍離心機。
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