一、 Riboclone M-MLV(H- ) cDNA合成技術
　　Promega公司的RibocloneR M-MLV(H- ) cDNA合成系統(tǒng)采用M-MLV反轉錄酶的RNase H缺失突變株取代AMV反轉錄酶,使合成的cDNA更長。該系統(tǒng)的*鏈合成使用M-MLV反轉錄酶,cDNA第二鏈合成采用置換合成法,采用RNaseH和dna聚合酶Ⅰ進行置換合成,zui后用T4 DNA聚合酶切去單鏈末端,方法簡便易行。該系統(tǒng)試劑包括：
　　20μg 特異性引物
　　200μl M-MLV*鏈緩沖液(5×)，配方如下: 250mmol/L Tris·Cl pH8.3(37℃時); 375mmol/l KCl; 　　　　　15mmol/L MgCl2; 50mmol/L DTT; 10mmol/L dATP, dCTP, dGTP, dTTP混合物(各2.5mmol/L)
　　2×625μ rRNasinR rna酶抑制劑
　　10,000μ M-MLV反轉錄酶, RNase H-
　　5μg 對照RNA
　　400μl M-MLV第二鏈緩沖液(10×)，配方如下：
　　　　400mmol/L Tris·Cl ,pH7.2; 850mmol/L KCl; 44mmol/L MgCl2;
　　　　30mmol/L DTT; 0.5mg/ml BSA。
　　500μ RNase H
　　500μ DNA聚合酶Ⅰ
　　100μ T4 DNA聚合酶Ⅰ
　　2×1.25ml 不含核酸酶的水
　　以上所有試劑除對照RNA需在-70℃保存外,其余均可保存于-20℃,可以合成40μg mRNA。