保存：
大多肽在-20℃很穩(wěn)定，特別是冷凍干燥并保存在干燥器中，在將它們暴露于空氣之前， 冷凍干燥多肽可以放于室溫。這將是濕度影響減少，當(dāng)無(wú)法冷凍干燥時(shí)，的方法是以小的工作樣量存放。 
對(duì)于含Cys, Met orTrP的多肽，脫氧緩沖劑對(duì)其溶解*，因?yàn)檫@種多肽可易空氣氧化， 在封瓶前，慢慢流過(guò)多肽的氮?dú)饣驓鍤庖矔?huì)降低氧化作用。含Gln或Asn的多肽也容易降解，所有這些肽與不含這些有問(wèn)題解苷的那些肽相比，生命期有限。 
溶解性：
大多肽的道選溶劑是超純抽氣水。稀乙酸或氨水分別對(duì)于堿性或酸性多肽的溶解很重要。這些方法不溶的多肽， 需要DMF、脲、guanidiniam chloride或acetonitnle來(lái)溶解，這些溶劑可能某些實(shí)驗(yàn)有副作用。所以我們建議設(shè)計(jì)多肽時(shí)要加注意。
殘基Ala, Cys , Ile, Leu, Met, Phe和Val將全增加多肽的溶解難度。 
您需要特殊的多肽或任何技術(shù)幫助，請(qǐng)隨時(shí)與我們。 我們包你*滿(mǎn)意，對(duì)于我們不能適當(dāng)合成的順序，我們不收費(fèi)。

多肽的保存和操做

包裝 1mg或更少的多肽按凈重包裝，聲明的小瓶重不含相關(guān)抗離子和水。 例如，氨基酸分析決定的肽含量是80%， 在1mg樣品中，那么瓶中毛重是1.25mg。
大量的多肽以毛重算。標(biāo)出的重量含相關(guān)抗離子和水， 例如，25mg樣品中肽百分比為90%，那么，實(shí)際肽量為25mg×90%=22.5mg
不要把肽含量和純度搞混了。肽的純度可能是100%， 而肽含量相關(guān)帶電基團(tuán)（如Arg, Lys ）的抗離子量和肽新水性決定。這是合成肽的本身特性。

凍干肽的保存
所有產(chǎn)品應(yīng)存于冰箱， 為-20℃。多數(shù)肽以此方法可以存放幾年不變。

肽溶液的保存
溶液肽遠(yuǎn)比凍干形式不穩(wěn)定，溶液應(yīng)為中性pH(pH5-7), -20℃保存的，為避免樣品的反復(fù)凍融， 分成小樣存放。一份樣品融凍后未用完， 應(yīng)扔掉，細(xì)菌降解有時(shí)會(huì)成為溶液肽的麻煩， 為克服此，肽應(yīng)溶于無(wú)菌水， 或肽溶液用0.2μ M濾膜過(guò)濾。

多肽的重建和操作

多數(shù)肽溶于無(wú)菌蒸溜水。初次溶解時(shí)，要注意使初始濃度比要求濃度大，如果多肽僅有限溶解性， 這便允許加入其它溶解劑或緩沖鹽。
如果多肽在水中的溶解性有限，有幾種選擇可幫助溶解：
對(duì)堿性肽用稀乙酸（含Arg , Lys , His）
酸性肽用稀氨水（含Asp, Glu）
對(duì)極疏水的肽用10%有機(jī)修飾物（Acetonitnile , Methanol）
極不溶的肽用DM50或DMF
guanicline hydrochloride或脲的濃溶液也很有用， 與上述方法合用， 聲處理也是溶解多肽的有效手段。

多肽的包裝
目錄中所有多肽除特別說(shuō)明外，純度為95~98%。包裝為小瓶?jī)龈煞邸?/span> 除特別注明外，多肽凈重包裝， 例如，1mg瓶的β-amyloid 1-40含1mg的多肽。多肽凈重由氨基酸分析得到的肽含量計(jì)算。例如， 一個(gè)多肽樣品毛重5mg，氨基酸含量85%， 多肽凈重為5mg×0.85=4.25mg。請(qǐng)注意， 多肽含量不是多肽純度，與抗離子象乙酸鹽和溶劑，特別是水結(jié)合量合成多肽的本身特性。多肽純度可能達(dá)100%， 但合成品中多肽含量由氨基酸組成，硫水性， 和多肽對(duì)溶劑和離子的暴露決定，特別是在純化過(guò)程中， 無(wú)論多肽如何純，凍干粉多肽含量一般為70-85%。 剩余15-30%由其它基本非肽成份構(gòu)成。

多肽應(yīng)用和保存
多肽具廣泛的溶解性。多肽不溶的主要問(wèn)題是形成二級(jí)結(jié)構(gòu)。除了zui太肽外，這點(diǎn)都會(huì)發(fā)生， 在有多重疏水殘基的肽中更顯著。鹽會(huì)促進(jìn)二級(jí)結(jié)構(gòu)形成。我們建議先在無(wú)菌蒸餾水或去離子中溶解多肽。如需要增加溶解率， 可用聲處理。溶解仍有問(wèn)題， 加少量稀乙酸（10%）或氨水，會(huì)便于溶解。
要長(zhǎng)期保存多肽， 冷凍干燥，冷干粉可在-20℃或更低存放幾年而很少或無(wú)降解。溶液中的多肽遠(yuǎn)不穩(wěn)定。 多肽易受細(xì)菌降解，應(yīng)用無(wú)菌純化水溶解。
含有Met, Cgs或Try殘基的多肽溶液由于氧化，壽命有限。應(yīng)溶于無(wú)氧溶劑， 為防止重復(fù)凍融的破壞， 建議溶解過(guò)量的肽的便實(shí)驗(yàn)，其余多肽以固體形成保存。

固相多肽合成Fmoc方法

任何多肽鏈的關(guān)鍵連接為肽鍵，由一個(gè)氨基酸的氨基與另氨基酸的縮合形成。通常一個(gè)氨基酸由一個(gè)中心碳原子組成，它由四個(gè)基它基團(tuán)包圍： 氨基、羰基、基和側(cè)鏈。 側(cè)鏈，稱(chēng)為R，區(qū)別不同氨基酸的結(jié)構(gòu)。某些側(cè)鏈含有干擾肽鍵形成的功能團(tuán)。因此側(cè)鏈功能團(tuán)的封閉很重要。
圖工顯示了Fmoc合成的一般流程，首先*個(gè)Fmoc氨基酸通過(guò)一個(gè)酸性接頭接到不溶載體樹(shù)脂上，Fmoc去保護(hù)通過(guò)用堿處理樹(shù)脂來(lái)完成，一般是Poperidine。 用預(yù)先激活或原位激活連接第二個(gè)Fmoc氨基酸。要求總多肽合成后，通過(guò)TFA分離來(lái)除去樹(shù)脂和去保護(hù)。

Fmoc分離

固相多肽合成中多肽分離主要用酸解

Fmoc法用弱酸，比如TFA或TMSBr。各種添加劑， 一般為thiol compound , 水和酚，用來(lái)保護(hù)多肽的免分離中Carbocation的破壞。

下列保護(hù)基與TFA和TMSBr分離相合：（略）

基于保護(hù)基團(tuán)的類(lèi)別，必須使用去保護(hù)劑的組合。 例如， 當(dāng)Boc和tButyl存在時(shí)，它們的Carbocation對(duì)應(yīng)物能與Trp, Tyr和Met反應(yīng)形成tbutyl產(chǎn)物。EDT是極有效的t-butyl trifluoroacetate清除劑， 但它不保護(hù)Trp。 因此，必須加水以控制烷基化。Trp的吲哚環(huán)和Tyr的OH極易與Pmc反應(yīng)。水再次表現(xiàn)出對(duì)此反應(yīng)的抑制。Trt和Mtr基團(tuán)也有相似情形。較此適當(dāng)組合清除劑將極大降低副反應(yīng)。

tBoc和CBZ多肽合成

tBoc合成法見(jiàn)圖3

tBoc法的分離法

Boc使用強(qiáng)酸，比如HF，TFMSA或TFMoTf。分離加入各種添加劑， 一般為thiol化合物以保護(hù)多肽免受carbocation破壞。

HF分離法（如下）略

TFMSOTf分離

TMSOTf分離

SPPS的一般連接方法

適于固相多肽合成的連接反應(yīng)要求酰化反應(yīng)，對(duì)同源多肽zui有效。

Fmoc SPPS連接方法 FmocSPPSzui常用的連接法是活性酯， 要么原位，要預(yù)先激活。 起初P-nitrophenyl和N-hydnxysuccinimide激活酰是常用形式。 甚至，有HOBt時(shí)，連接反應(yīng)也很慢， 此外，Fmoc氨基酸ONSu、酯與succinimido-carbonyl-β-alanine -N-Hydroxysuccinidide酯副產(chǎn)物的形成相關(guān)。今天zui常用的激活酯是Opfp和Odhbt。有HoBt時(shí)反應(yīng)速度極快，副產(chǎn)物少。

另一方面， 使用象DCC，HBTU，BOP，BOP-Ce，或TBTU活化劑時(shí)， 能原位進(jìn)行許多連接反應(yīng)。Carbondiimide的直接添加是選擇。 然而，TBTU和HBTU第二個(gè)出現(xiàn)，接著BoP, zui后是BoP-CE。再者， 酯連接發(fā)現(xiàn)BoP/HoBt>Carbodiimido/HoBt> Carbodiimido/ODHbT> Carbodiimide/Opfp。

zui近以來(lái)，HOAt和其對(duì)應(yīng)Uronium鹽同類(lèi)物HATU的發(fā)展，發(fā)現(xiàn)此HoBt和HBTU具更強(qiáng)催化活性， 結(jié)果是增加連接產(chǎn)出，縮短連接時(shí)間， 消旋降低。 故此，更適合阻位氨基酸的連接，使得難合成肽的合成更成功。

tBoc SPPS的普通連接法

Carbodiimides, 主要是DCC是使用多年的連接試劑，主要的問(wèn)題是激活和酰化過(guò)程中dicyclohexylurea的沉淀。并且伴有許多副反應(yīng)， 已有幾種產(chǎn)生可溶脲的Carbodiimide，例如DIC, t-butylmethyl-和t-tatyllethyl-carbodiimide, 但是這些試劑未解決副反應(yīng)的問(wèn)題。結(jié)果生產(chǎn)出了新的激活劑。 首先是ＢＯＰ，隨后是PyBrop, PyBOP, HBTU, TBTU和ＨＡＴＵ。所有前述試劑都要活性堿基。

所有前面討論的ＤＣＣ及其衍生物都通過(guò)對(duì)稱(chēng)酐的形成起作。通常， 對(duì)稱(chēng)酐反應(yīng)性*已廣泛用于ＳＰＳＳ，特別t-Boc合成中， 對(duì)稱(chēng)酐整合入Fmoc氨基酸有一些困難，例如，從N-(3-dimethylamino propyl ) -N?/FONT>-ethyl -carbodiimides -HG制備的對(duì)稱(chēng)酐， 由于Z-alkory-5(4H)-oxayolne中間體的形成， 在Carbodiimidie和tertiany amines存在時(shí)重排， 還有， 不是所有的Fmoc 對(duì)稱(chēng)酐都溶于ＤＣＭ，或者無(wú)論所有試劑如何都不溶。
對(duì)稱(chēng)酐的另一種改變是混合酐，Carboxglic-Carbonate或Ｃarboxglic-phosphinic混合酐， 典型的情況且是， 由活性isobutyl-或isopropyl-choroformate制備這些， 用Nox被阻氨基酸代替phosphinic chloride。通常反應(yīng)迅速及少或無(wú)有副反應(yīng)。

混合酐，N-carboxy酐(NCAS), 也叫，Leuch酐，已廣泛用于多聚氨基酸制備，這類(lèi)化合物聯(lián)合Nox保護(hù)和活化炭基，一旦和另一個(gè)氨基酸或肽殘基反應(yīng)， 釋放CO2做為副產(chǎn)物。

用處理α氨基酸很容易得到ＮＣＡ衍生物，在嚴(yán)格調(diào)控條件下， ＮＣＡ衍生物常結(jié)晶析出，便可使用。這些條件要求嚴(yán)格控制合成中的ＰＨ，在ＰＨ值低于１０時(shí)，ＮＣＡ和肽或氨基酸殘基反應(yīng)產(chǎn)物，肽-Carbamate易失去CO2形成自由α－氨基端， 發(fā)生聚合。pH10.5時(shí)，ＮＣＡ便水解隆解。 所以反應(yīng)在ＰＨ10.2條件下進(jìn)行。別的條件要求是反應(yīng)在０℃進(jìn)行2分鐘，要強(qiáng)烈攪動(dòng)。 反應(yīng)產(chǎn)物老消旋， 帶有自由α-氨基，可以增加另一個(gè)酐而延伸。

液相合成
基于將單個(gè)N-α保護(hù)氨基酸反復(fù)加到生長(zhǎng)的氨基成份上，合成一步步地進(jìn)行， 通常從合成鏈的C端氨基酸開(kāi)始，接著的單個(gè)氨基酸的連接通過(guò)用DCC，混合炭酐， 或N-carboxy酐方法實(shí)現(xiàn)。Carbodiimide方法包括用DCC做連接劑連接N-和C-保護(hù)氨基酸。重要的是， 這種連接試劑促接N保護(hù)氨基酸自己炭基和C保護(hù)氨基酸自由氨基間的縮水，形成肽鏈， 同時(shí)產(chǎn)出N，N?/FONT>-dyaylcohercylurea副產(chǎn)物。 然而， 此方法因其導(dǎo)致消旋的副反應(yīng)，或在強(qiáng)堿存在時(shí)形成5(4H)-oxaylones和N-acylurea而受到影響。慶幸地是， 這些副反應(yīng)能zui小化，如果還不能*消除。方法是加入象HoSu或HoBT這樣的連接催化劑， 此外，此方法也可用于合成N保護(hù)氨基酸的活性酯衍生物。依次產(chǎn)生的活性酯將自發(fā)與任何別的C保護(hù)氨基酸或肽反應(yīng)形成新的肽。 
當(dāng)從副產(chǎn)品, diaydohexylurea分離活性酯有困難時(shí)，可用混合Carbonic酐方法， 此方法由兩步組成，*步是在有tertiary堿的有機(jī)溶劑中用適當(dāng)?shù)孽；燃せ?/span>Nx保護(hù)氨基酸的炭基，第二步是讓肽或氨基酸的自由氨基與Carbonic酐反應(yīng)。Carbonic酐通常加到自由氨基的14倍。
雖然此方法在低溫時(shí)高產(chǎn)，產(chǎn)品純， 但也有其缺點(diǎn)， 例如，由羰基的強(qiáng)激活酐衍生物有消旋傾向。然而此問(wèn)題在使用Nx-α-Urethane保護(hù)基（Cb2, 或tBoc）時(shí)便不會(huì)發(fā)生。進(jìn)一步： 由于高反應(yīng)性， 混合Carbonic酐 傾向5(4H)-oxagolomes, Urerbanes diacyimide, 酯的形成， 并易失調(diào)。
促進(jìn)這些副反應(yīng)的條件是高溫，延長(zhǎng)激活時(shí)間（即，混合酐形成后， 加到alkylchlorocarbonate和amine成份的時(shí)間，amine組成的空間占位，平共處和混合酐的不完整形成。幸運(yùn)的是， 大多這些副反應(yīng)， 除形成啞唑酮和脲烷外，可通過(guò)低溫進(jìn)行反應(yīng)（~-15℃），大為減少，并且縮短活化時(shí)間（~1-2分鐘）。為了使啞唑酮和尿烷形成zui少，要實(shí)行如下措施：1）必要性須用無(wú)水有機(jī)溶劑，乙酸，四氫 喃，t-butand, 或acetonitrile; 2） 應(yīng)使用tertiary堿和N-methglmorpholine；3） 必須用C b2或tBoc N- α保護(hù)氨基酸。
雖然用isobutyl-和ethylchlorocarbonate常用來(lái)形成羰酐， 但確有別的連接試劑，例如，EEQD和IIQD用來(lái)與CarboxaP成份反應(yīng)形成erhyl-或isobutyl carbonate衍生物。 不同于傳統(tǒng)酐程序，EEQD和IIQD不要求堿，也不要求低溫，通常要求一種有機(jī)溶劑（有許多也用）中0.1-0.4M濃度的等摩爾量的羰和氨成份。之后EEQD或IIQD多加5-10%, 溫合液室溫?cái)嚢?/span>15-24小時(shí)。真空除去溶劑后，殘留物溶于乙酸， 用1NHaHCO3 , 10% 枸橡酸和鹽水洗劑，之后用無(wú)水Na2So4干燥，蒸發(fā)，產(chǎn)品可以重晶結(jié)或?qū)游黾兓?/span>
這種方法避免了用堿，但仍有消旋和尿烷副產(chǎn)物，水平與經(jīng)典相當(dāng)。 所以?xún)?yōu)勢(shì)中于容易方便，但應(yīng)注意，兩種方法的詳細(xì)比較，目前為重仍未有。

HPLC分析和純化
分析HPLC使用柱子和泵系統(tǒng)，可以經(jīng)受傳遞高壓，這樣可以用極細(xì)的微粒（3-10μ m）做填料。由此多肽要在幾分鐘內(nèi)高度被分析。
HPLC分兩類(lèi)：離子交換和反相。 離子交換HPLC依靠多肽和固相間的直接電荷相互作用。柱子在一定PH范圍帶有特定電荷衍變成一種離子體，而多肽或多肽混合物，由其氨基酸組成表現(xiàn)出相反電荷。 分離是一種電荷相互作用，通過(guò)可變PH， 離子強(qiáng)度， 或兩者洗脫出多肽，通常， 先用低離子強(qiáng)度的溶液，以后逐漸加強(qiáng)或一步一步加強(qiáng)，直到多肽火柱中洗脫出。離子交換分離的一個(gè)例子使用強(qiáng)陽(yáng)離子交換柱。如sulfoethylaspartimide通過(guò)酸性PH中帶正電來(lái)分離。
反相HPLC條件與正常層析正相反。多肽通過(guò)疏水作用連到柱上，用降低離子強(qiáng)度洗脫， 如增加洗脫劑的疏水性。通常柱子由共價(jià)吸附到硅上的碳?xì)渫殒湗?gòu)成，這種鏈長(zhǎng)度為G4-G8碳原子。 由于洗脫是一種疏水作用。長(zhǎng)鏈柱比短鏈對(duì)小的， 高帶電肽好。另一方面大的疏水肽用短鏈柱洗脫好。 然而，總體實(shí)踐中， 這兩類(lèi)柱互變無(wú)多少顯著差別，別類(lèi)載體由碳水化合物構(gòu)成， 比如苯基。
典型的操作常由兩綬沖劑組成，0.1%TFA-H2o和80% acetonitrile 0.1%TFA--H2o稀acetonitrile。用線型梯變以每分鐘0.5%到1.0%改變的速度混合。常見(jiàn)分析和純化用柱為4.6×250mm(3-10μ m)和22×250mm(10μ m). 如果用徑向填柱，那么大小是8×100（3-10μ m）和25×250mm(10μ m)
大量各種緩沖劑含許多不同試劑，比如heptafluorobutyric酸，0.1%磷酸， 稀He formic酸(5-6%, pH2-4), 10-100mM NH4HCO3, 醋酸鈉/氨，TFA/TEA，磷酸鈉或鉀，異戊酚。這樣許多不同組合可形成緩沖劑，但要注意一點(diǎn)：硅反相柱料不能長(zhǎng)時(shí)間暴露于高pH，甚至微堿pH， 因?yàn)檫@樣會(huì)破壞柱子。

純化
SPPS提取的粗肽含許多副產(chǎn)物，早期的純化方法包括離子交換，分溶和反溶注析， 更現(xiàn)代的方法是反相HPLC，一般于60殘基或更少的肽很成功。 當(dāng)反相HPLC失敗時(shí)，可按合離子交換HPLC。
通常分析HPLC結(jié)果用于決定純化條件。例如，一種太肽用30%（0.1%TFA）acetonitrile洗脫出， 這是分析HPL定出的。那么選擇acctonitrile濃度更低的緩沖液使得在isocratic條件下（比如28%,0.1% TFA acetonitrile）多肽在溶劑保持時(shí)間4-5分鐘后洗脫。這樣， 根據(jù)柱子類(lèi)型， 我們的純化條件用16-35%(0.1%TFA) acetonitrile線型梯度， 在一兩小時(shí)內(nèi)完成，之后用分析HPLC查檢各種比例，使用我們isocranic條件選定的緩沖液。