【實驗目的】
掌握地衣酚顯色法測定RNA含量的原理和方法

【實驗原理】
RNA與濃鹽酸共熱時發生降解，產生的戊糖又可轉變為糠醛，在FeCl3或CuCl2催化下，糠醛與地衣酚（3,5—二羥基甲苯）反應形成綠色復合物，該產物在670nm處有zui大吸收。當RNA濃度為20μg／m1~250μg／m1時，吸光度與RNA濃度成正比。

【實驗材料】
1.實驗器材
恒溫水浴,721分光光度計。
2.實驗試劑
（1）RNA標準液：稱取10mgRNA(需先定磷確定其純度)用少量水溶解(若不溶可用2mol／L NaOH溶液調至pH7.0)，定容至100m1，濃度為100µg／ml。
（2） RNA樣品液：用上述實驗方法提取的RNA樣品
（3） 地衣酚試劑：取0.1g地衣酚溶于100ml濃鹽酸，再加入0.1gFeCl3·6H20。該溶液使用前新鮮配制。

【實驗操作】
1．標準曲線的繪制
取干燥試管6支，編號，按表所示加入試劑。
試劑
管號

0

1

2

3

4

5

RNA標準溶液，ml

0.0

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

蒸餾水，ml

1.0

0.9

0.8

0.7

0.6

0.5

地衣酚試劑，ml

3.0

3.0

3.0

3.0

3.0

3.0

A670

加樣完畢后混勻，于沸水浴中加熱20min，取出置自來水中冷卻，以零號管為對照，670nm處測吸光度。以吸光度為縱坐標，RNA濃度為橫坐標作圖，繪制標準曲線。
2．樣品測定
取試管3支，兩支為樣品管，—支為空白管，在樣品管中加入1.0m1樣品液，再加3.0m1地衣酚試劑，混勻，置沸水浴中加熱20min，取出冷卻。空白管操作與標準曲線制作中零號管相同。以空白管調零點，于670nm處測吸光度，根據吸光度值從標準曲線上查出相應的RNA含量。

【實驗結果討論】
1．地衣酚反應特異性較差，凡戊糖均有此反應，DNA及其他雜質也有影響。故一般測定RNA時，可先測定樣品中DNA含量，再算出RNA含量。
2．本法較靈敏。樣品中蛋白質含量高時，應先用5%三氯醋酸溶液將蛋白質沉淀后再測定，否則將發生干擾。