1、問：請問有人養過CHO細胞嗎？文獻報道說用DMEM培養基來養，但我不太清楚具體是高糖還是低糖？

參考見解：CHO細胞用高糖DMEM養就可以了，比較好養，10%血清，小牛和胎牛都可以，長得比較慢，跟你所用的血清有一定的關系，大概需要兩天傳一次代。在塑料板上比玻璃板上好養，感覺如果在玻璃板上養而且不包被的話，好像細胞不易伸展開來。

2、問：要轉染鉀通道pcDNA3.1入細胞，是選cho細胞呢還是hek293細胞？cho細胞轉染效率高嗎？

參考見解：表達一個蛋白的時候，首先要確認你的蛋白確實表達了，因為有很多原因可以導致蛋白表達出問題（質粒序列有錯誤，質粒純度低，表達的蛋白不穩定，轉染效率太低等）。所以在做任何功能性實驗之前，必須要先確認蛋白的表達，通常的實驗有：

（1）采用免疫熒光法。由于需要熒光二抗，比較貴。但直觀，可以確定轉染效率，采用好的顯微鏡時，可以大致知道表達蛋白在細胞中的位置。

（2）WESTERN-BLOT。可以確認表達的蛋白分子量，以及表達的量。但不直觀。

（3）構建一個N或C端帶熒光蛋白的質粒。這樣比較費時間，同時攜帶的熒光蛋（通常使用GFP）有可能干擾蛋白的正常功能。但好處是轉染后可以很方便的觀察轉染效率，蛋白在細胞中的位置等。

當然以上方法都無法知道質粒有無發生突變，所以如果你的蛋白有表達但沒有功能，首先要做一個DNA測序確認你的序列沒有問題。事實上質粒發生突變的機會比大多數人想象的要多得多！

3、問：由于我要用CHO細胞生產基因工程抗體，用什么培養基能夠很好的使之良好的生長

參考見解：培養CHO細胞用F12，并且由于F12中加入了一些微量元素與無機離子，因此可以在血清很少的情況下應用，是無血清培養中常用的基礎培養基，特別適合進行單細胞培養和克隆化培養。我們的前輩曾用F12在無血清的條件下成功的克隆出CHO細胞。

無血清培養CHO細胞有兩種方法：一種是直接向試劑公司購買只適用于培養CHO細胞的無血清培養基（好像HyClone就有）；第二種方法實際上是有血清培養，只不過血清濃度很低罷了，可以近似的認為無血清。在第二種方法里，又可以分出兩條途徑：你可以分步進行，也可以一步到位。分步法是，CHO細胞先在含10％血清的常規培養基里培養，再到含5％血清的培養基里培養，再到含2.5％血清的培養基里培養，依此類推，培養基里的血清不斷下降，直到一個能讓CHO細胞良好生長的zui低血清濃度。一步到位法就是省去中間的步驟，直接由起點的血清濃度到終點濃度。

4、問：我要做穩定轉染，表達融合蛋白并將蛋白質純化來檢測其功能。僅僅把目的基因插入pcDNA3.1，沒有插入其他的基因或者tag。現準備轉染CHO細胞。就相關問題想問問：

有的文獻上沒有署名K1或是DHFR,普通所寫的CHO細胞是指那種？野生型CHO細胞又是指的哪種？這三種細胞是不是因為CHO-K1和CHO/DHFR-有擴增基因GS 和DHFR,可以更為有效的擴增進而表達，比野生型CHO在轉染中更起作用？

如果就我的實驗要求，CHO-K1或者CHO/DHFR-更加適合，那么轉染CHO-K1是不是可以直接轉染？而轉染CHO-DHFR-需要和攜帶DHFR-的標記質粒共轉染？

參考見解：做穩定表達是需要把目的基因克隆到一定的載體上的，這個載體同時可以過表達一個抗性基因，如果載體整和到基因組上，這個抗性已經能夠克服篩選壓力，而這個時候你的目的蛋白也得到了有效的表達。

（1）野生型CHO就是ＣＨＯ－Ｋ１

（2）CHO－DHFR-是指ＤＨＦＲ缺陷型細胞，ＤＨＦＲ作為篩選標記．

（3）你用pcＤＮＡ3.1的話,可以直接轉染CHO-K1,加G418篩選即可.