好準備工作之后，先把舊的培養基倒掉。再用PBS洗兩遍，然后加0.05%胰酶/EDTA，劑量根據培養瓶大小定，一般是25cm 2 的瓶子大約0.8-1ml，輕搖10——15秒，使消化液均勻覆蓋瓶底即可，再倒掉。置培養箱3-5分鐘(看消化效果而定)，等大部分細胞呈流沙狀滑落時，即加入培養基終止消化，一般以1:5左右的比例傳代(視計數結果和看細胞長滿的程度而定)。

這種方法養比較頑強的細胞很好，既節省步驟，也降低了離心和較長時間消化對細胞帶來的損傷，其實大家也可以試試用這種方法養別的細胞。

主要做的還是養骨髓基質干細胞(MSC)，做好準備工作：

1、倒掉舊培養基;

2、PBS洗兩遍(如果能很容易就洗去雜質和懸浮的死細胞，洗一遍也可以);

3、加0.05%胰酶/EDTA，(劑量同上)，置培養箱3分鐘(看效果而定)，待大部分細胞呈流沙狀滑落時，加入一定量培養基(為了計數和按比例傳代操作方便)終止消化反應，輕吹勻幾次，吸取細胞懸液至15ml離心管(留一滴計數)，1400rpm/10分鐘，棄懸液，加入一定量培養基，一般按1:3傳，大概每5天左右傳一次。

以上操作均應注意無菌。