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上海士鋒生物科技有限公司
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PCR技術*講座

時間:2017/5/31閱讀:480
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聚合酶鏈反應(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期發展起來的體外核酸擴增技術。它具有特異、敏感、產率高、快速、簡便、重復性好、易自動化等突出優點;能在一個試管內將所要研究的目的基因或某一dna片段于數小時內擴增至十萬乃至百萬倍,使肉眼能直接觀察和判斷;可從一根毛發、一滴血、甚至一個細胞中擴增出足量的DNA供分析研究和檢測鑒定。

過去幾天幾星期才能做到的事情,用PCR幾小時便可完成。PCR技術是生物醫學領域中的一項革命性創舉和里程碑。

PCR技術*講座

PCR技術簡史
PCR的zui早設想 核酸研究已有100多年的歷史,本世紀60年代末、70年代初人們致力于研究基因的體外分離技術,Korana于1971年zui早提出核酸體外擴增的設想:“經過DNA變性,與合適的引物雜交,用dna聚合酶延伸引物,并不斷重復該過程便可克隆tRNA基因”。
PCR的實現 1985年美國PE-Cetus公司人類遺傳研究室的Mullis等發明了具有劃時代意義的聚合酶鏈反應。其原理類似于DNA的體內復制,只是在試管中給DNA的體外合成提供以致一種合適的條件---摸板DNA,寡核苷酸引物,DNA聚合酶,合適的緩沖體系,DNA變性、復性及延伸的溫度與時間。
PCR的改進與完善 Mulliszui初使用的DNA聚合酶是大腸桿菌dna聚合酶i的Klenow片段,其缺點是:
①Klenow酶不耐高溫,90℃會變性失活,每次循環都要重新加。
②引物鏈延伸反應在37℃下進行,容易發生模板和引物之間的堿基錯配,其PCR產物特異性較差,合成的DNA片段不均一。

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