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上海士鋒生物科技有限公司
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雙色紅外熒光檢測技術

時間:2016/10/18閱讀:512
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基因組序列的迅速獲得推動了一門新興學科——功能基因組學的發展,這一學科重點關注基因功能的變化。擴增性片段長度多態性(Amplified restriction fragment length polymorphism,AFLP)分析以及反向遺傳學都是功能基因組學的重要組成部分。

傳統的反向遺傳學,例如用轉座子(transposon)敲除特定基因,雖然可以準確測定表型,但需要進行耗時的轉基因或復雜的組織培養。而且由于這種基因敲除的方法將整個基因敲除,無法觀察到活性基因功能部分缺失的結果。

為克服此基因敲除方法的局限性,進一步獲得關于活性基因突變的信息,Fred Hutchinson癌癥研究中心的研究者們發明了一種定向誘導基因組局部突變(TILLING: Targeting Induced Local Lesions In Genomes)技術。該方法具有簡單的特點,它利用化學突變方法來獲得所有基因的傳統的點突變等位基因系列。對那些表型分析時會牽涉到亞致死等位基因的重要基因,TILLING的方法具有其*的優勢。隨著TILLING方法有效應用到越來越多的生物種類,如果蠅,擬南芥,斑馬魚,玉米等,它在遺傳學研究方面的重要價值也越發體現出來。

但由于點突變一般很難被檢測出來,一直是TILLING技術應用上的一個障礙。要得到好的結果,要求檢測儀器不僅靈敏度高,還能夠識別假陽性位點。我們在這兒給大家引薦一種更簡便,靈敏,準確的高通量TILLING分析技術:雙色紅外熒光檢測技術。

雙色紅外熒光檢測技術是美國LI-COR公司的技術。LI-COR長期致力于此項技術在生物學研究中的應用,他們開發的Odyssey雙色熒光掃描系統及DNA遺傳分析系統都取得了很大成功。由于雜質、干擾分子在紅外區幾乎不發光,用紅外熒光進行檢測的背景非常低,靈敏度很高,可檢測到低達1moles的熒光分子。加上雙通道檢測(680nm激發,710nm檢測;780nm激發,820nm檢測),兩個通道檢測波長相距110nm,相對于通常的可見熒光四色檢測來說,幾乎沒有光譜重疊的干擾(見下圖),保證了TILLING分析中每一個突變堿基的準確識別及整個檢測的靈敏度。

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