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報告基因(reporter gene)是一種編碼可被檢測的蛋白質或酶的基因,是一個其表達產物非常容易被鑒定的基因。把它的編碼序列和基因表達調節(jié)序列相融合形成嵌合基因,或與其它目的基因相融合,在調控序列控制下進行表達,從而利用它的表達產物來標定目的基因的表達調控,篩選得到轉化體。
作為報告基因,在遺傳選擇和篩選檢測方面必須具有以下幾個條件:(1)已被克隆和全序列已測定;(2)表達產物在受體細胞中不存在,即無背景,在被轉染的細胞中無相似的內源性表達產物;(3)其表達產物能進行定量測定。
在植物基因工程研究領域,已使用的報告基因主要有以下幾種:
胭脂堿合成酶基因(nos)、章魚堿合成酶基因(ocs)
nos、ocs這兩個基因是致瘤土壤農桿菌(Agrobacterium tumfaciens)的Ti質粒*的,對Ti質粒進行改造,用相應的致瘤農桿菌轉化植物體時,如果外源基因轉入植物體中,則這兩種報告基因在植物根莖葉中均能表達,不受發(fā)育調控,檢測時直接用轉化體提取液進行紙電泳,染色后在紫外光下觀察熒光即可。
新霉素磷酸轉移酶基因(nptⅡ)、氯霉素乙酰轉移酶基因(cat)
nptⅡ、cat及慶大霉素轉移酶基因,均為抗生素篩選基因,相關的酶可以對底物進行修飾(磷酸化、乙酰化等),從而使這些抗生素失去對植物生長的抑制作用,使得含有這些抗性基因的轉化體能在含這些抗生素的篩選培養(yǎng)基上正常生長,也可以用轉化體提取液體,外用同位素標記,放射自顯影篩選轉化體。氯霉素乙酰轉移酶基因測時可通過放射自顯影觀察。
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