三階段純化策略

純化問題所涉及的具體步驟zui終取決于樣品的性質。但也有共同可參考的階段

捕獲階段：目標是澄清、濃縮和穩定目標蛋白。

中度純化階段：目標是除去大多數大量雜質，如其它蛋白、核酸、內毒素和病毒等。

精制階段：除去殘余的痕量雜質和必須去除的雜質。

分離方法的選擇

根據蛋白質的特殊性質采用不同的分離方法：

每一種方法都有分辨率、處理量、速度和回收率之間的平衡。

分辨率：由選擇的方法和層析介質生成窄峰的能力來實現。總的來說，當雜質和目標蛋白性質相似時，在純化的zui后階段分辨率是重要因素。

處理量：一般指在純化過程中目標蛋白的上樣量。如上樣體積、濃度等。

速度：在初純化中是重要因素，此時雜質如蛋白酶必須盡快除去。

回收率：隨著純化的進行漸趨重要，因為純化產物的價值在增加。

在三階段純化策略中每一種方法的適用性見下表：

提示：

1、通過組和各種方法使純化步驟之間的樣品處理減至zui少，以避免需要調節樣品。*個步驟的產物的洗脫條件應適宜于下一個步驟的起始條件。

2、硫酸銨沉淀是常用的樣品澄清和濃縮方法，所以HIC是捕獲階段的理想方法。

3、GF很適宜在由濃縮效應的方法（IEX、HIC、AC）后使用，凝膠過濾對上樣體積有限制，但不受緩沖液條件的影響。

4、在捕獲階段選擇對目標蛋白具有zui高選擇性或/和處理量的方法

5、如果對目標蛋白的性質了解甚少的情況下，可采用IEX-HIC-GF的方法組合作為標準方案。

6、只要目標蛋白耐受的情況下，可以考慮采用RPC方法用于精制階段。

注：應該指出，三階段純化策略不是說所有的策略都必須是三個純化步驟。所用的步驟數目取決于純度要求和蛋白的zui終用途。

附：純化工藝路線